艾滋病抗體檢測醫學科技論文

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1.材料及方法

1.1材料

高質量的質控物：為保證質控物的良好質量，首先，質控物要求在220℃的環境下保存；其次避免反復凍融。購于衛生部臨檢中心。ELISA檢測抗HIV試劑盒：北京萬泰HIV（1+2型）ELISA抗體診斷試劑盒。96孔洗板機(芬蘭丹尼公司)；MK-2型酶標儀(芬蘭丹尼公司)；移液器等。

1.2方法

有關質控血清的制備，應在無菌條件下用含有10%小牛血清PBS緩沖液將陽性對照血清稀釋成低值弱陽性,然后將稀釋后的血清以每管0.5ml進行分裝,并將其置20℃環境下保存備用。為實現對質控血清的精密性檢測，在檢測樣品的同時，還應對抗-HIV質控血清進行檢測，將同時檢測到的數據進行比較，以比較其精密性。洗板：洗板所用的洗液先用蒸餾水進行適當的配置以保證其PH值正常。要求浸泡時間多余45s，洗板后殘液不得超過2μl，也即人工扣板墊紙不濕。稀釋方法：由于抗體檢測實驗所加樣品僅需10μl，少加或者多加都會造成不同程度的誤差，而影響到抗體檢測的質量。由此，移取精準的樣品的移液器在獲取樣品量方面十分重要。因此，應確保以下幾點：一保證移液器和移液頭間連接的嚴密性；二取樣時為避免移液器粘帶血清，應保證移液頭恰與液面接觸；三為避免對灰帶區的誤判，在稀釋樣品液時不能使用滴瓶，而采用移液器進行樣品的滴加，以保證抗體檢測質量的穩定。基于以上要點，在板中加入100μl稀釋液再加10μl標本,同時吹吸3次混勻。顯色：ELISA反應中最佳的色原底物是TMB。但在加入終止液15min后濃度過高的就會產生灰褐色絮狀沉淀。因此，處理嚴格按照使用說明書來控制顯色的溫度、時間等外在因素，以避免人為因素所造成的吸光度等的升降外，還應在加入終止液的15min內及時進行比色。

2.結果

2.1穩定性試驗

使用制備的質控品對艾滋病抗體每隔一個月進行檢測。當S/CO波動范圍未超出質控范圍，也即實驗的穩定性檢測屬真。

2.2制作質控圖

在使用ELISA質量控制方法來控制艾滋病抗體檢測實驗室質量時，為保證在實際中獲得良好的效果，首先應做好OCV及RCVK來確定失控的標準，然后利用Westgard規則判定失控，使用生化L2J圖進行。由于采用ELISA方法進行實驗室質量控制的目的在于檢測艾滋病抗體，故而，應確保這一方法的敏感性。可采用許斌提出的臨界值血清界定法，試劑所設陰陽對照為內對照,另設臨界值、高值陽性和2份正常人陰性對照,作為外對照與標本同時檢測,臨界值S/CO>1,高值陽性S/CO>10,正常人陰性對照A值在01050～01100，當其中所存在的各項中有一項不符合標準即為失控。臨界值為敏感度監控、陰性對照為特異性監控、高值為“HOOK”監控，由此可見，臨界值血清界定既反映ELISA的靈敏度又兼顧特異性。

3.討論

ELISA方法檢測HIV的實驗室質量控制，可用吸光度值來表示，還可以使用S/CO值來表示。當前，艾滋病抗體檢測一般使用ELISA法，這一方法具有靈敏度較高的特點，非常適于當前眾多血站系統對HCV、抗2HIVHBsAg等的檢測。本人依據多年的指控監測工作經驗認為，在使用較強陽性的質控物進行作圖時，以上兩種方法都會產生較好的實驗效果；但是，對于一些中性、弱陽性的質控物進行作圖時，S/CO值的表示方法更為科學、準確。但是在實際的實驗室檢測中，也存在著眾多影響這一方法有效運用的不利因素，因此，加強艾滋病抗體檢測的實驗室質量控制具有現實性的意義。