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隨著社會的發展和進步,人們的生活水平和生活質量都得到了很大的改善,因此,對醫學的發展也提高了關注。目前,醫學教學觀念和教學模式都發生了很大的轉變,學校也開始了對高素質人才的有效培養和教學,其中,虛擬仿真技術是醫學教學中的重要手段和方式,對傳統的醫學實驗教學提出了很大的改進。虛擬仿真技術對推動醫學教學改革、創新教學模式和培養學生的綜合技能都有著重要的作用和影響。本文主要介紹了虛擬仿真技術的概念,并分析了虛擬仿真技術在醫學實驗教學中的具體應用。
關鍵詞:
虛擬仿真技術;醫學;實驗教學
隨著科學技術的迅速發展,醫學實驗教學方面出現了許多的新技術和應用,對醫學教學產生了很大的影響。其中虛擬仿真技術是目前比較先進的技術應用,且獲得了廣泛的應用和發展,特別是對計算機技術和多媒體技術的應用,提高了醫學實驗的教學質量,創新了醫學實驗教學的模式。虛擬實驗教學是一種在計算機技術基礎上發展起來的情景模擬技術,能夠讓用戶體驗到一種身臨其境的感覺,實現和具體的情景接觸,產生一定的體驗,為實際的操作提供一定的基礎。
1虛擬仿真技術的概述
虛擬仿真技術是在計算機技術的基礎上發展起來的新興的科學技術,是指利用多媒體技術的結合,創造形成一個有視覺、聽覺和觸覺的虛擬現實環境,讓用戶體驗到一種身臨其境的感覺。在這個虛擬的環境中,用戶能夠感受到空間中客體的存在,也可以和虛擬空間中的客體進行相關的互動,這項技術的應用,主要是加快用戶對相關知識的認識效率。虛擬仿真技術涉及的方面比較多,主要包括計算機技術、多媒體技術、網絡技術和人工智能技術等,另外,還有計算機的圖像處理和模式的識別等,是現代仿真技術的有效發展和外延[1]。虛擬仿真技術的主要特點就是,讓用戶獲得真實的體驗,和虛構的客體進行交互,并產生一定的想象。在虛擬的空間中,實驗人員可以進行和現實世界中同樣的活動和實驗,而且受到的外界影響因素比較小,實驗產生的效果也更好一些。特別是在醫學教學中的應用,能夠有效的提高學生的實踐能力和創新能力,因此,虛擬仿真技術的應用具有重要的意義。
2虛擬仿真技術在醫學實驗教學中的應用
虛擬仿真技術的發展和應用對醫學實驗教學產生了很大的影響,特別是對傳統的醫學實驗教學方式和實驗模式進行了很大的改進。傳統的醫學實驗教學中,缺少實驗的設備和實驗的客體,學生的實際操作能力得不到有效的鍛煉,所以,對學生的學習和操作能力培養不到位[2]。虛擬仿真技術的應用為學生進行實驗操作提供了一定的基礎,也實現了對學生的有效培養。目前虛擬仿真技術在醫學實驗教學中的優勢主要體現在以下四個方面。
2.1虛擬仿真技術改善了醫學實驗教學設備在醫學實驗教學中,對設備的要求比較高,主要包括一些實驗用的動物或者尸體、實驗用到的儀器和設備以及相關的實驗經費等,都對實驗教學的有效進行產生了一定的影響。隨著社會的發展,解剖學在目前獲得了很大的發展,也是醫學教學中最基礎和最重要的課程,所以,一定的實驗設備在教學中是非常關鍵的,對教學的有效性影響也很大。目前,虛擬仿真技術的廣泛應用和發展,很好的解決了醫學實驗教學中的這些問題,不但豐富了實驗教學設備,學生可以利用虛擬的“尸體”進行操作和實踐,也很好的鍛煉了學生的實踐動手操作能力。
2.2虛擬仿真技術能夠提高學生的興趣虛擬仿真技術能夠為學生提供相關的實驗環境,創造一定的基礎性實驗條件,同時,還能夠實現學生在虛擬的空間環境中和客體進行有效的交流,提高學生對相關內容的認識和理解。虛擬仿真技術在醫學試驗教學中的應用,能夠將聲音、圖像和相關的多媒體演示功能進行結合,豐富實驗教學過程和教學內容,充分的提高了學生的興趣[3]。同時,將具體的教學內容變得形象和生動,而且有一定的視覺沖擊力,方便了學生的理解和掌握,因此,提高了實驗教學的效率和質量。比如,在進行細胞膜的教學時,可以利用虛擬仿真技術建立細胞結構,動態化的展示,可以讓學生更好的觀察和學習。
2.3虛擬仿真技術突破了時間和空間上的限制虛擬仿真技術的應用,對傳統的醫學實驗教學產生了很大改變,打破了時間和空間上的限制,學生可以通過虛擬仿真技術對動物的內部結構進行有效的觀察,以及實現動態化的觀察[4]。比如要了解一些藥物的成分和產生的身體反應,在傳統的教學中,通過一定的講述過程是無法實現有效教學的,學生也難以理解。因此,虛擬仿真技術的應用,實現了這些過程的快速進行和變化,同時,將這些反應過程和變化情況能夠清晰的表現出來,幫助學生進行學習和理解。
2.4虛擬仿真技術避免了在具體實驗中的危險情況醫學實驗過程存在一定的危險性,會對人體的健康產生一定的危害,比如一些感染性的疾病等。所以,隨著虛擬仿真技術在實驗教學中的應用,避免了學生和實驗對象的直接接觸,而是通過虛擬的方式產生實驗的客體,所以,不需要考慮實驗過程中產生一些危險性的因素,因此,對相關的實驗進行有很大的幫助。除此之外,虛擬仿真技術也很好的幫助學生積累了臨床經驗,有效的鍛煉了學生的實際操作能力,有利于學生的綜合水平提高和發展。
3結語
隨著虛擬仿真技術的發展和應用,改善了醫學實驗教學,虛擬仿真技術的應用,加深了學生對于醫學知識的認識和理解,提高了醫學實驗教學的質量和效率。另外,虛擬仿真技術打破了時間和空間上的限制,完善了實驗教學的設備,并有效的避免了在試驗中的不安全因素,對醫學實驗教學具有重要的意義。
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關鍵詞:高中數學;學習方法;探究
中圖分類號:G633.6文獻標識碼:B文章編號:1672-1578(2013)04-0190-01
1.導致學生數學成績差的原因
1.1被動學習。許多同學進入高中后,還像初中那樣,有很強的依賴心理,跟隨老師慣性運轉,沒有掌握學習主動權。表現在不定計劃,坐等上課,課前沒有 預習,對老師要上課的內容不了解,上課忙于記筆記,沒聽到"門道",沒有真正理解所學內容。
1.2學不得法。老師上課一般都要講清知識的來龍去脈,剖析概念的內涵,分析重點難點,突出思想方法。而一部分同學上課沒能專心聽課,對要點沒聽到或聽不全,筆記記了一大本,問題也有一大堆,課后又不能及時鞏固、總結、尋找知識間的聯系,只是趕做作業,亂套題型,對概念、法則、公式、定理一知半解,機械模仿,死記硬背.也有的晚上加班加點,白天無精打采,或是上課根本不聽,自己另搞一套,結果是事倍功半,收 效甚微。
1.3不重視基礎。一些"自我感覺良好"的同學,常輕視基本知識、基本技能和基本方法的學習與訓練,經常是知道怎么做就算了,而不去 認真演算書寫,但對難題很感興趣,以顯示自己的"水平",好高鶩遠,重"量"輕"質",陷入題海,到正規作業或考試中不是演算出錯就是中途"卡殼"。
1.4進一步學習條件不具備。高中數學與初中數學相比,知識的深度、廣度,能力要求都是一次飛躍。這就要求必須掌握基礎知識與技能為進一步學習作好準備。高中數學很多地方難度大、方法新、分析能力要求高。如二次函數在閉區間上的最值問題,函數值域的求法,實根分布與參變量方程,三角公式的變形與靈活運用,空間概念的形成,排列組合應用題及實際應用問題等。客觀上這些觀點就是分化點,有的內容還是高初中教材都不講的脫節內容,如不采取補救措施,查缺補漏,分化是不可避免的。
2.解決方法
2.1研究學科特點,尋找最佳學習方法。數學學科擔負著培養學生運算能力、邏輯思維能力、空間想象能力,以及運用所學知識分析問題、解決問題的能力的重任.它的特點是具有高度的抽象性、邏輯性和廣泛的適用性,對能力要求較高.學習數學一定要講究"活",只看書不做題不行,埋頭做題不總結積累不行,對課本知識既要能鉆進去,又要能跳出來,結合自身特點,尋找最佳學習方法.華羅庚先生倡導的"由薄到厚"和"由厚到薄"的學習過程就是這個道理.方法因人而異,但學習的四個環節(預習、上課、整理、作業)和一個步驟(復結)是少不了的。
2.2加強輔導,化解分化點。如前所述高中數學中易分化的地方多,這些地方一般都有方法新、難度大、靈活性強等特點.對易分化的地方教師應當采取多次反復,加強輔導,開辟專題講座,指導閱讀參考書等方法,將出現的錯誤提出來讓學生議一議,充分展示他們的思維過程,通過變式練習,提高他們的鑒賞能力,以達到靈活掌握知識、運用知識的目的。
2.3循序漸進,防止急躁。由于學生年齡較小,閱歷有限,為數不少的高中學生容易急躁,有的同學貪多求快,囫圇吞棗,有的同學想靠幾天"沖刺"一蹴而就,有的取得一點成績便洋洋自得,遇到挫折又一蹶不振.針對這些情況,教師要讓學生懂得學習是一個長期的鞏固舊知識、發現新知識的積累過程,決非一朝一夕可以完成,為什么高中要上三年而不是三天!許多優秀的同學能取得好成績,其中一個重要原因是他們的基本功扎實,他們的閱讀、書寫、運算技能達到了自動化或半自動化的熟練程度。
2.4研究學科特點,尋找最佳學習方法。數學學科擔負著培養學生運算能力、邏輯思維能力、空間想象能力,以及運用所學知識分析問題、解決問題的能力的重任.它的特點是具有高度的抽象性、邏輯性和廣泛的適用性,對能力要求較高.學習數學一定要講究"活",只看書不做題不行,埋頭做題不總結積累不行,對課本知識既要能鉆進去,又要能跳出來,結合自身特點,尋找最佳學習方法.華羅庚先生倡導的"由薄到厚"和"由厚到薄"的學習過程就是這個道理.方法因人而異,但學習的四個環節(預習、上課、整理、作業)和一個步驟(復結)是少不了的。
[摘要]目的:觀察益氣、活血方藥對老年大鼠肝臟衰老相關基因表達的影響。方法:以自然衰老大鼠為衰老模型,采用RTPCR、Western blotting法研究益氣、活血方藥對老年大鼠肝臟p16、p21、增殖細胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)、cyclin D1和cyclin E mRNA轉錄和蛋白表達的影響。結果:老年大鼠肝臟p16、p21、cyclin D1 mRNA轉錄和蛋白的表達增加;PCNA、cyclin E mRNA轉錄和蛋白的表達降低。與老年大鼠比較,益氣、活血方藥可下調老年大鼠肝臟cyclin D1 mRNA轉錄和蛋白表達,上調促進增殖基因cyclin E mRNA轉錄和蛋白表達,但對p16、p21和PCNA的調節作用不明顯。結論:益氣、活血方藥主要通過調控cyclin D1和cyclin E mRNA轉錄和蛋白表達而促進細胞增殖。
[關鍵詞]衰老大鼠; 肝細胞; p16; p21; 增殖細胞核抗原; cyclin D1; cyclin E; 益氣方; 活血方
Effects of recipes for replenishing qi and activating blood on senescence related gene expressions in the liver of aging rats
ABSTRACT Objective: To observe the effects of recipes for replenishing qi and activating blood on p16, p21, proliferating cell nuclear antigen (PCNA), cyclin D1 and cyclin E gene expressions in the liver of aging rats. Methods: A recipe for replenishing qi and a recipe for activating blood were administered to aging rats respectively, and the effects of the above recipes on the expressions of senescence related genes (p16, p21, PCNA, cyclin D1 and cyclin E) were examined by RTPCR and Western blotting methods. Results: The expressions of p16, p21 and cyclin D1 mRNAs and proteins in the liver of the untreated aging rats were upregulated, while the expressions of PCNA and cyclin E mRNAs and proteins decreased. As compared with the untreated aging rats, both recipes could downregulate the expressions of cyclin D1 mRNA and protein and upregulate the expressions of cyclin E mRNA and protein, but had no obvious effects on the expressions of mRNAs and proteins of p16, p21 and PCNA. Conclusion: Recipes for replenishing qi and activating blood can improve the liver cell proliferation of aging rats via downregulating the expressions of cyclin D1 mRNA and protein and upregulating the expressions of cyclin E mRNA and protein.
KEY WORDS aging rats; hepatocytes; p16; p21; proliferating cell nuclear antigen; cyclin D1; cyclin E; qibenefiting recipe; bloodactivating recipe
隨著細胞及分子生物學的發展,已經發現一些與細胞衰老密切相關的基因及轉錄因子(反式作用因子)[1~3]。縱觀歷代中醫文獻,延緩衰老的方藥基本屬于補腎、健脾、益氣和活血范疇。近代研究顯示:上述四類方藥均有不同程度抗自由基、調節免疫功能、提高肝臟蛋白質含量、改善肝臟超微結構等延緩衰老的作用[4]。實驗研究還表明:補腎方藥能促進老年大鼠肝臟cHras、cmyc、cfos、cjun mRNA的表達,下調p53 mRNA的表達[5]。本實驗從細胞增殖調控角度,根據中醫理論,從益氣活血的抗衰經典方中分別選擇幾味有代表性的中藥組成小復方,以自然衰老大鼠為衰老模型,應用RTPCR和Western blotting法研究益氣、活血方藥對老年大鼠肝臟衰老相關基因p16、p21、cyclin D1、增殖細胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)和cyclin E表達的影響。
1材料與方法
1.1實驗中藥 益氣方選用黨參、黃芪、炙甘草(取自《時氏醫道》保元湯),活血方選用川芎、當歸、赤芍(取自經方四物湯)。中藥制劑采用水提醇沉法制備后,分裝于消毒好的塑料瓶中,于-20 ℃保存。
1.2實驗動物 SD雄性大鼠(上海中醫藥大學實驗動物中心提供)24只,分成青年對照組(5月齡)、老年對照組(22月齡)、老年益氣組(22月齡)和老年活血組(22月齡)。老年益氣組和活血組的用藥劑量為臨床成人劑量的20倍(按每千克體質量的用藥量進行換算),采用飲料方式給藥,每周服藥5 d,停藥2 d,自18~22月齡連續給藥4個月。
1.3RTPCR 肝組織細胞總的RNA按Trizol一步法提取,具體步驟按試劑說明書操作。βactin PCR引物[6]:5’CCAGCCATGTACGTTGCTATCCAG 3’,5’GGAACCGCTCATTGCCAATGGTGA 3’,擴增片段為378 bp;p16 PCR引物:5’ATGGAGTCCTCTGCAGATAG 3’,5’TTAG CGCTGCTTTGGGGGTT 3’,擴增片段為480 bp;p21PCR引物:5’ATGTCCGATCCTGGTGATGT3’,5’GGGCTTTCTCTTGCAGAAGA 3’,擴增片段為495 bp;cyclin D1 PCR引物:5’ATGGAACACCAGCTCCTGTG 3’,5’TGGTGTTCCATGTCGGTGG 3’,擴增片段為888 bp;PCNA PCR引物:5’ATGTTTGAGGCACGCCTGAT3’,5’AGATCCTTCTTCATCTTCGA 3’,擴增片段為786 bp;cyclin E PCR引物:5’AAAGAAGAAGGTGGTTCCGA 3’,5’TCATTCTGTCTCCT GCTCAC 3’,擴增片段為1 191 bp。PCR擴增反應總體積為50 μl。擴增程序為:95 ℃(30 s) [變性94 ℃(30 s)退火55 ℃(30 s)延伸72 ℃ (30 s)]×30個循環72 ℃ (7 min)4 ℃貯存。根據目的片段的長短及引物的Tm值設置退火溫度及延伸時間。PCR產物鑒定電泳,紫外燈下觀察,圖像分析系統掃描。
1.4Western Blotting 采用放射免疫沉淀測定法(radioimmunoprecipitation assay, RIPA)[7]。取肝臟組織100 mg加入單去污細胞裂解液900 μl,冰浴中勻漿。勻漿后立即加入100 μl蛋白酶抑制劑苯甲基磺酰氟液(phenylmethylsulphonyl fluoride, PMSF)和40 μl混合蛋白酶抑制complete液(complete EDTAfree protease inhibitor cocktail tablet, 1片加1 ml水),4 ℃ 10 000 r/min離心10 min,取上清液于-70 ℃冷凍保存。24 h后10 000 r/min離心10 min,取上清液分裝,-70 ℃冷凍保存。Lowry (FolinCiocalteau)法[8]測定蛋白含量。各組蛋白各取30 μg,采用十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodium dodecylsulfatepolyacrylamide gel electrophoresis, SDSPAGE)和免疫印跡反應,用Supersignal ECL發光劑熒光顯色X光膠片曝光,觀察蛋白條帶。
1.5圖像處理及統計分析 RTPCR、Westernblotting實驗結果分別采用Leica Q500IW和上海復日Smartview 2001生物電泳圖像分析系統進行圖像分析。所有實驗數據均采用SPSS 9.0統計軟件進行統計處理,統計學方法采用方差分析及q檢驗。
2結果
2.1益氣、活血方藥對大鼠肝臟衰老相關基因mRNA表達的影響與青年組比較,老年大鼠肝臟p16、p21、cyclin D1基因mRNA的表達明顯上調(P
2.2益氣、活血方藥對大鼠肝臟衰老相關基因蛋白表達的影響與青年組比較,老年大鼠肝臟p16、p21、cyclin D1基因蛋白表達明顯上調(P
圖1 p16和p21瓊脂糖凝膠電泳(略)
Fig 1 Agarose gel electrophoresis of p16 and p21
M: Marker; 1:Young control group; 2: Untreated group; 3: Qibenefiting recipetreated group; 4: Bloodactivating recipe treated group
圖2 cyclin D1、PCNA和cyclin E瓊脂糖凝膠電泳(略)
Fig 2 Agarose gel electrophoresis of cyclin D1, PCNA and cyclin E
M: Marker; 1: Young control group; 2: Untreated group; 3: Qibenefiting recipetreated group; 4: Bloodactivating recipetreated group
表1 益氣、活血方藥對大鼠肝臟衰老相關基因mRNA表達的影響(目的基因/βactin)(略)
Tab 1 Effects of qibenefiting and bloodactivating recipes on mRNA expressions of p16, p21, PCNA, cyclin D1 and
cyclin E genes in the liver of rats (target gene/βactin)
*P
表2 益氣、活血方藥對大鼠肝臟衰老相關基因蛋白表達的影響(目的基因/βactin)(略)
Tab 2 Effects of qibenefiting and bloodactivating recipes on protein expressions of p16,p21,PCNA,cyclin D1 and
cyclin E genes in the liver of rats (target gene/βactin)
**P
圖3 p16、p21、PCNA、cyclin D1和cyclin E蛋白印跡雜交結果(略)
Fig 3 Western blotting results of p16, p21, PCNA, cyclin D1 and cyclin E genes
1:Young control group; 2: Untreated group; 3: Qibenefiting recipetreated group; 4: Bloodactivating recipetreated group
3討論
衰老是生物體在其生命的后期階段所出現的進行性、全身性、內在性,由多因素共同作用的循序漸進的退化過程。近年來從基因水平研究衰老過程已成為衰老機制研究中的熱點。已經發現:有些細胞增殖調控相關基因,主要是原癌基因、抑癌基因及端粒酶調控相關基因等,在年輕和衰老細胞中的表達明顯不同。原癌基因是一組參與細胞增殖和生長調控的基因。細胞衰老時,多數原癌基因的表達水平降低,少數升高。由于原癌基因表達產物大多是信號傳導途徑或細胞周期蛋白相關成員,它們的表達水平降低或活性減弱,會使細胞對刺激的反應性降低,或使細胞周期進程減慢,從而降低細胞增殖水平。抑癌基因的主要功能是對細胞分裂和生長進行適當抑制,防止細胞周期失控導致無限擴增和分裂生長。衰老時,有些抑癌基因的表達或活性增加。具有細胞增殖調控功能的衰老相關基因包括p21、p16、細胞周期素(cyclin)D1、周期素依賴性激酶(cyclindependent kinases, CDK) 2、p53、視網膜母細胞瘤(retinablastoma, Rb)基因和PCNA等。上述衰老相關基因的調控是相互聯系的[9]。
中醫認為人體的生長、發育和衰老與“腎”密切相關。“腎精虛衰”是衰老的主要原因。同時又認為“脾胃為血氣陰陽之根蒂”,“脾胃既和,其人壽;脾胃不和,其人夭”,因此也重視奉養脾胃精氣在延年中的作用。《素問?至真要大論》還提出“氣血正平,長有天命”,氣血運行失常,則能影響臟腑、經絡、陰陽等方面功能的平衡,出現五臟六腑各方面病變,加速衰老過程。因此縱觀歷代文獻有關“耐老”、“不老”方藥,研究其治法基本屬于補腎、健脾、益氣、活血范疇。
本實驗主要在比較補腎、健脾、益氣、活血方藥對衰老的人胚肺二倍體成纖維細胞2BS細胞增殖調控作用的基礎上,進一步觀察益氣、活血方藥對老年大鼠肝臟衰老相關基因p16、p21、cyclin D1、PCNA和cyclin E的mRNA轉錄和蛋白表達的影響,以探討益氣、活血方藥對老年大鼠肝臟細胞增殖的作用機制。結果表明:老年大鼠肝臟p16、p21、cyclin D1基因mRNA和蛋白表達明顯升高;PCNA、cyclin E mRNA和蛋白表達明顯降低。提示:老年大鼠肝臟細胞周期蛋白依賴的激酶抑制因子p21、p16表達增高,可能通過抑制cyclin D1CDK4和cyclin ECDK2的活性,使Rb蛋白磷酸化水平降低,從而抑制細胞增殖。p21還可能與PCNA結合,使DNA合成受阻。由于細胞不能進入增殖周期,最終發生衰老。細胞周期蛋白cyclin D1是原癌基因的表達物,與CDK4結合后,可促進G1/S期轉變。文獻報道:衰老時cyclin D1蛋白水平升高,但cyclin D1CDK4復合物活性降低,影響細胞增殖[10]。本實驗結果顯示:衰老大鼠肝臟cyclin D1的升高與文獻報道一致。PCNA為DNA聚合酶δ的附屬蛋白,參與DNA復制;cyclin E與CDK2結合,參與G1/S期的轉變。本實驗結果顯示:與青年鼠比較,老年大鼠PCNA和cyclin E的表達明顯下調,則必然影響細胞周期的正常運行,抑制細胞增殖。益氣、活血方藥能不同程度降低老年大鼠肝臟cyclin D1基因mRNA和蛋白的表達,上調肝臟cyclin E基因mRNA和蛋白的表達,但對p16、p21、PCNA mRNA和蛋白的表達作用不明顯。結合本實驗室前期實驗流式細胞儀檢測細胞周期的結果(益氣、活血方藥可降低老年大鼠肝組織細胞G0/G1期比例,增加G2/G1期細胞比值),提示益氣、活血方藥可促進老年大鼠肝組織細胞的增殖[11]。益氣、活血方藥還能不同程度提高2BS衰老細胞的代謝活力和降低衰老相關半乳糖苷酶的活力[12,13],推測益氣、活血方藥促進老年大鼠肝組織細胞增殖的作用可能部分與下調cyclin D1、上調cyclin E mRNA和蛋白的表達有關。
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關鍵詞:益精穩壓方;高血壓病;內皮素-1;大鼠
高血壓是一種常見的心血管疾病,也是導致心腦血管事件的重要獨立危險因素。內皮素-1(ET-1)是內皮素(ET)家族的主要成員,其主要由血管內皮細胞產生,是一種強烈的血管活性物質。近年來的研究證明,內皮素-1與高血壓的密切相關。本研究以中醫的病因病機為基礎,結合現代檢測手段、實驗指標,探討中醫中藥防治高血壓病的可能機制。
1、資料和方法
1.1實驗動物:雄性健康SHR大鼠32只,8周齡,體重150+15g,隨機分為模型組及中藥低劑量組、中劑量組、高劑量組,每組8只。取WKY大鼠8只,8周齡,體重150±15g,設為空白組。
1.2治療方法:益精穩壓方由生地、熟地、制首烏、女貞子、旱蓮草、枸杞子、白蒺藜、酸棗仁、地龍、三七粉、丹參組成,將其煎制濃縮而成的復方制劑。中劑量組濃度設為臨床用量20倍。其高劑量組濃度1.88g/ml,中劑量組0.94g/ml,低劑量組0.47g/m1。治療開始即予相應濃度中藥復方濃縮劑灌胃,每鼠每日3ml,模型組、空白組予等量蒸餾水灌胃,每日1次,8周為1療程,共觀察1療程。
1.3實驗方法:采用上海高血壓研究所研制的電腦控制自動大鼠心率血壓測量儀測量大鼠鼠尾動脈壓,測量并記錄治療前及治療4周后、8周后的大鼠血壓水平。并于治療前及治療4周后、8周后在大鼠尾部取血2ml,離心,凍存所得血清,于實驗結束后放射免疫分析(ELISA)法測定血清ET-1水平。
1.4統計學處理:統計分析采用SPSS13.0統計軟件,計量資料以均數±標準差(x±s)表示,數據經檢驗服從正態分布,組間比較采用配對t檢驗。P0.05為有顯著性差異,P0.01為有非常顯著性差異。
2、結果
2.1各組治療前后血壓水平的變化比較:詳見表1。觀察發現SHR大鼠較WKY大鼠血壓明顯上升。治療4周后,與模型組比較,中藥高劑量組血壓值降低,有顯著性差異(P0.05);而中藥低劑量組、中劑量組則無顯著性差異(P0.05)。治療8周后,與模型組比較,中藥中劑量組、高劑量組的血壓值均有下降,且有顯著性差異(P0.05)。
2.2各組治療前后血清ET-1水平的變化比較:詳見表2。ET-1水平,治療4周后,與治療前比較,模型組、低劑量組升高,有顯著性差異(P0.05),中藥中劑量組及高劑量組則無顯著性差異(P0.05)。與模型組比較,中藥干預各組ET-1水平升高不明顯,無顯著性差異(P0.05)。治療8周后,與治療前比較,中藥各劑量組ET-1均升高明顯,有非常顯著性差異(P0.01);與治療4周后比較,模型組ET-1水平升高,有顯著性差異(P0.05);而中藥各劑量組ET-1水平則無明顯升高(P0.05)。
3、討論
[關鍵詞] 益氣除痰方;肺癌;DP化療;全血細胞計數
[中圖分類號] R734.2 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721(2017)01(b)-0134-04
近年來,肺癌發病率和死亡率增長快速,已成為對人類健康和生命威脅最大的惡性腫瘤之一[1]。大約80%的肺癌患者在確診時已無手術條件,國際上越來越重視肺癌患者的生存質量和生存時間[2]。中醫扶正治療不僅意味著“最好的支持治療”,還有更為深奧和實用的意義與價值。許多中醫藥學者著力于應用扶正祛邪等方劑提高肺癌化療患者的免疫功能,以此提高其生存質量,穩定癌瘤和延長生存期[3-4]。對于非小細胞肺癌(NSCLC)患者,化療在殺滅癌細胞的同時對人體正常細胞亦有較大殺傷作用,因此在化療期間聯合使用保護機體免疫功能、減輕化療毒性的藥物非常必要。本研究探討益氣除痰方對NSCLC患者DP方案化療期間的全細胞計數的影響和臨床療效,現報道如下。
1資料與方法
1.1一般資料
收集2014年3月~2016年3月廣州中醫藥大學第一附屬醫院腫瘤科以及中山醫科大學腫瘤醫院接受DP方案化療的NSCLC患者,所有患者符合《新編常見惡性腫瘤診治規范》的相關標準[5],病理學確診為NSCLC,影像學顯示有可測量病灶。中醫肺癌參照《中醫腫瘤學》分型標準[6],分為肺郁痰瘀、脾虛痰濕、陰虛痰熱、氣陰兩虛4種證型。本研究經過醫院倫理委員會審查通過,患者均被告知并簽署化療方案和參與實驗研究的知情同意書。患者共63例,其中男43例,女20例,平均年齡為(63.71±11.45)歲。將63例患者分為西醫組(33例)、中西醫結合組(30例)。兩組患者的年齡、性別、評分等比較差異無統計學意義(P>0.05)(表1),具有可比性。
1.2納入標準
經病理學明確診斷,使用DP化療方案者;年齡為18~90歲;不伴嚴重的心、肝、腎及骨髓功能障礙者,化療前白細胞計數≥4.0×109/L,中性粒細胞絕對值≥2.0×109/L,血紅蛋白含量≥100 g/L,血小板計數≥100×109/L,KPS評分≥60分者;預計生存期>6個月;近期未使用任何防治骨髓抑制的藥物。
1.3排除標準
無明確病理的晚期肺癌患者;合并肺癌以外癌癥、嚴重感染的患者;合并心、腦、肝、腎和造血系統等嚴重疾病和精神病患者;資料不全、依從性差的患者;孕D或兒童。
1.4治療方法
兩組均給予對癥支持治療。西醫組給予單純DP治療方案:順鉑(DDP)25 mg/m2,靜滴,第1天,多烯紫杉醇(DOC)75 mg/m2,靜滴,第1~3天。21 d為1個療程,至少2個療程[7]。中西醫結合組在西醫組治療基礎上給予中藥治療:以益氣除痰方為主方,辨證施治,隨證加減。益氣除痰方:黨參30 g、茯苓15 g、薏苡仁30 g、生半夏15 g(先煎)、浙貝15 g、山慈菇15 g、守宮6 g、魚腥草30 g、天冬20 g、仙鶴草30 g。隨證加減:肺郁痰瘀型加桃仁15 g,貓爪草15 g;脾虛痰濕型加白術15 g,葶藶子15 g;陰虛痰熱型加生地24 g,知母15 g;氣陰兩虛型加西洋參10 g,五味子10 g。煎服方法:水800 ml,煎至150 ml,復煎150 ml,兩次藥混勻,分2次飯后溫服[8-11]。治療周期:30 d為1個療程,2個療程以上。
1.5觀察指標及評價方法
觀察患者化療前,化療第21、42天的全血細胞(白細胞、中性粒細胞絕對值、紅細胞、血紅蛋白和血小板)計數。觀察兩組患者治療42 d后的KPS評分[7];生活質量評分:參照我國試行的腫瘤患者生活質量評分(1990年)[12];體重變化情況;不良癥狀積分評定標準參照中藥新藥臨床研究指導原則(試行)[13]。
1.6統計學方法
收集所有數據,整理建表,應用統計學軟件SPSS 13.0進行分析。臨床資料、不良癥狀積分采用t檢驗或χ2檢驗。全血細胞計數、生活質量評分、KPS評分和體重經SW法分布分析,非正態分布數據用中位數M,四分位數間距Q(P25,P75)表示,采用非參數秩和檢驗,以P
2結果
2.1兩組患者化療前后全血細胞計數的比較
中西醫結合組化療第21、42天的全血細胞計數(除外化療第21天血小板計數組內前后比較)分別與化療前比較,差異有統計學意義(P
2.2兩組患者化療前后KPS評分、生活質量評分、體重的比較
中西醫結合組化療第21、42天的KPS評分、生活質量評分、體重分別與化療前比較,差異有統計學意義(P
2.3兩組患者治療后不良癥狀積分比較
中西醫結合組治療后的咳嗽、咳痰、氣促積分均明顯低于西醫組(P
與西醫組比較,*P
3討論
以鉑類為基礎的化療方案是目前對不能手術的中晚期NSCLC最主要的治療手段之一[14-15]。Davidoff等[16]研究發現少數美國老年肺癌患者接受西醫治療,其中多數僅使用單方抗癌藥物。中醫學認為,肺癌的病理病機主要由于正氣虛損、陰陽失衡、臟腑功能失調導致氣滯血瘀、痰凝毒聚、蘊郁積聚于肺。益氣除痰方具有固本扶正、祛濕除痰、化痰散結和補脾益氣之功效。
骨髓抑制是化療較常見的毒副作用,化療藥物對骨髓抑制作用與血細胞壽命有關。白細胞的半壽期為6 h,血小板的半壽期5~7 d,紅細胞的半壽期為120 d,因此白細胞及血小板減少較易較早發生。紅細胞系干細胞數減少,不易從外周血紅細胞計數反映出來[17]。目前對腫瘤化療治療中患者骨髓造血功能狀況的監測主要是檢測全血細胞計數。患者在化療期間使用益氣除痰方配合溫補肺、脾、腎三臟,陽獾靡蘊嶸,可提高化療耐受性,降低骨髓抑制程度。本研究結果顯示,中西醫結合組化療第21、第42天的全血細胞計數降低程度明顯輕于西醫組,提示NSCLC化療患者結合中醫藥治療能減輕骨髓抑制。
化療屬中醫學攻法的范疇,傷正氣,類似苦寒之劑,最易傷及脾胃,導致機體虛弱,脾胃功能失調,傷陽耗氣,出現脾虛或脾腎陽虛之證。謝勁松等[18]認為中醫藥治療肺癌的主要作用機制是調節神經內分泌,提高患者的免疫功能,抑制腫瘤細胞增殖,誘導腫瘤細胞分化和凋亡,防止其轉移,逆轉腫瘤細胞多藥耐藥,對腫瘤放化療有增敏減毒作用。劉俊波[19]從肺癌的病因病機、辨證論治和中西醫結合治療方面綜述了近幾年中醫藥治療晚期NSCLC的長足進步。中醫對肺癌的辨證施治、規范化治療及其療效評定標準,在腫瘤治療具有很好的優勢。在提高肺癌化療患者生活質量方面,中醫藥結合聯合化療起重要作用。中醫藥及中西醫結合治療肺癌在放化療階段及晚期患者的治療階段均為最佳治療方案;建立規范化、標準化的中醫腫瘤臨床療效評價體系,探索最佳的對NSCLC治療模式生活質量評價體系將是未來的發展趨勢。
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關鍵詞 計算機仿真技術 網絡技術 醫學機能實驗 應用
一、計算機仿真技術和網絡技術相結合是實現醫學機能實驗的關鍵技術
與傳統醫學機能實驗手段相比,利用計算機仿真技術和網絡技術相結合的醫學機能虛擬實驗具有實驗內容的豐富性、實驗過程的完整性和實驗結果的及時性、直觀性。由于模擬仿真醫學機能實驗無需相關實驗器具,無需實驗準備即可引導學生理解實驗的操作步驟以及實驗效果,可以作為機能學實驗教學的一個有益補充。對教師而言起到輔助教學的作用,對學生而言,則起到對所學知識的理解和強化作用。
(一)計算機仿真技術的發展為醫學機能仿真實驗提供了必要的技術條件
(1)仿真技術:仿真就是對現實系統的某一層次抽象屬性的模仿。我們利用這樣的模型進行試驗,從中得到所需的信息,然后幫助我們對現實中的某一層次的問題做出決策。仿真是一個相對概念,任何逼真的仿真都只能是對真實系統某些屬性的逼近。
(2)傳統的仿真方法:是一個迭代過程,即針對實際系統某一層次的特性(過程),抽象出一個模型,然后假設態勢(輸入),進行試驗,由試驗者判讀輸出結果和驗證模型,根據判斷的情況來修改模型和有關的參數。如此迭代地進行,直到認為這個模型已滿足試驗者對客觀系統的某一層次的仿真目的為止。
(3)計算機仿真技術:即是利用計算機進行仿真實驗,也稱為仿真機。從70年代末起,應用大規模集成電路計算機的發展,各種專用和通用仿真機得到極大普及和推廣。隨著計算機技術的迅猛發展,人們在綜合集成數字仿真和模擬仿真的優勢的基礎上,設計出在更高層次上的數字模擬混合仿真機,在一些特定的仿真領域內,這種智能仿真計算機機和高層次的數字模擬仿真機都取得令人鼓舞的成果。
(4)計算機仿真系統構成:為了建立一個有效的仿真系統,一般都要經歷建立模型、仿真實驗、數據處理、分析驗證等步驟。為了構成一個實用的較大規模的仿真系統,除仿真機外,還需配有控制和顯示設備。
(5)醫學機能虛擬實驗(仿真系統):隨著現代醫學的不斷發展,對醫學工作者提出了更高的要求,即不但要掌握人類已知醫學領域的醫學知識,也要具備解決未知醫學問題的能力,即創新能力和科學實驗的能力,而實驗學科在醫學學生能力培養中起著至關重要的作用。現代機能實驗學把生理學、病理生理學和藥理學實驗有機的融合在一起,成為一門獨立實驗學科。醫學機能實驗課程以活體為主要實驗對象,以正常生理功能——疾病生理——藥物作用為主線,把機體的不同功能變化通過實驗設計有機的聯系起來。醫學機能實驗中,部分實驗具有操作難度大、實驗具有一定危險性,實驗成本高等問題。譬如:醫學機能學中研究藥物對動物記憶的影響、安定的抗驚厥作用、杜冷丁的鎮痛作用、神經體液因素及藥物對心血管活動的影響、藥物急性毒性實驗、藥物半衰期的測定等實驗就存在一定的危險性,實驗操作難度大等問題。我們利用計算機仿真技術,則可以在很大程度上解決目前醫學機能實驗中所面臨的這些困難,并取得良好的教學實驗效果。由于模擬仿真實驗無需相關實驗器具,無需復雜的實驗準備即可引導學生理解實驗的操作步驟以及實驗效果,因此醫學機能虛擬實驗與傳統醫學機能實驗有機整合,既豐富了實驗教學手段,又提升了教學質量,有助于培養學生的實踐操作能力、創新精神和科研興趣。
(二)網絡技術的飛速發展為計算機仿真技術在醫學機能中的應用提供了廣闊前景
(1)網絡技術:網絡技術是從上世紀六十年代末美國國防部遠景研究規劃局為軍事實驗用而建立的網絡,名為ARPANET,八十年代初期ARPA和美國國防部通信局研制成功用于異構網絡的TCP/IP協議(網際傳輸控制協議),并投入使用;1986年在美國國會科學基金會的支持下,用通信線路把分布在各地的一些超級計算機連接起來,以NFSNET接替ARPANET;進而又經歷十幾年的發展形成Internet(互聯網)。其應用范圍也由最早的軍事、國防機構,拓展到科研教育機構,進而迅速覆蓋了全球的各個領域。網絡把分散的資源融為有機整體,實現資源的全面共享和有機協作,使我們能夠透明地使用資源并按需獲取信息。 網絡可以構造全球性和區域性的網絡,有廣域網、城際網、企業內部局域網等。網絡的根本特征就是實現資源共享,消除信息孤島。
(2)網絡的關鍵技術:網絡結點、寬帶網絡系統、資源管理和任務調度工具、應用層的可視化工具。網絡結點是網絡計算資源的提供者,包括高端服務器、集群系統、MPP系統大型存儲設備、數據庫等。寬帶網絡系統是在網絡計算環境中,提供高性能通信的必要手段。資源管理和任務調度工具用來解決資源的描述、組織和管理等關鍵問題。任務調度工具根據當前系統的負載情況,對系統內的任務進行動態調度,提高系統的運行效率。網絡計算主要是科學計算,它往往伴隨著海量數據。如果把計算結果轉換成直觀的圖形信息,就能幫助研究人員擺脫理解數據的困難。這需要開發能在網絡計算中傳輸和讀取,并提供友好用戶界面的可視化工具。
(3)網絡技術在醫學機能虛擬實驗中的運用:實驗設備功能雷同的實驗室,造成了實驗場地、儀器設備、實驗技術人員等教學資源的極大浪費。而通過網絡技術將醫學機能虛擬實驗機聯網組成醫學機能虛擬實驗室,既實現醫學機能信息資源的共享,同時也大大降低了實驗成本。教師利用網絡技術可以方便地為一個班或幾個班的學生演示和操作醫學機能實驗,大大提高了教學效率,而學生同樣可以利用網絡中的醫學機能虛擬實驗機跟隨教師的演示進行實驗操作,對提升學習效果也有一定的幫助。
二、計算機仿真技術和網絡技術在醫學機能虛擬實驗中的應用
(1)醫學機能虛擬實驗系統是采用計算機虛擬仿真與網絡技術相結合,運用服務器和客戶端的構架模式,涵蓋了目前大部分醫學機能學實驗而建立的模擬仿真系統。包括生理實驗項目、藥理實驗項目、病理實驗項目、人體實驗項目以及綜合實驗項目等。隨著醫學機能仿真技術的發展,利用計算機技術和網絡技術也便于對醫學機能虛擬系統進行擴充和升級,這樣可確保醫學機能虛擬實驗系統的長期生命力。
(2)醫學機能虛擬實驗均應包括該機能實驗的總體介紹、原理、相關實驗錄像、模擬實驗過程、仿真實驗操作等部分。全方位介紹了整個實驗,既注重整體,也著眼于細節,便于學生對實驗操作的充分理解和掌握。譬如利用血壓波形的核心模擬算法,對每一個波形的模擬都如此逼真,比如血壓模擬,不僅模擬出每個血壓波形的細節:收縮期、舒張期、心房波等,而且連二級呼吸波也進行了逼真的模擬。并且將刺激強度與反應的關系,刺激頻率與反應關系等實驗波形和肌肉收縮圖形同步反映。為學生進一步理解和掌握書本知識提供有益的幫助,大大提高學生的實踐操作能力。
(3)由于采用客戶/服務器的體系結構,并通過網絡將醫學機能虛擬實驗機連接在一起組成醫學機能實驗室,并在校園網范圍內進行教學和實驗,既方便教師教學,又方便學生的實驗操作,最大限度地合理使用學校有限的教學資源。以我校的實際應用為例:首先我們將醫學機能虛擬實驗系統安裝到教室里的教學用機上,教師可以在進行醫學機能學方面教學時,通過學校的校園網絡在任何一間教室都能很方便地使用醫學機能虛擬實驗中的資源和信息,極大地提升了醫學機能學的教學效果,也充分激發了學生的學習積極性。同時我們在學校計算機機房內集中安裝組成醫學機能虛擬實驗室,學生可以在教師的指導下進行醫學機能虛擬實驗操作,通過虛擬實驗,將一些平時不具備實際操作條件的醫學機能實驗過程完整地展示給學生,不僅能加深學生對醫學機能學知識的認識和掌握,更能在一定程度上提高學生的實踐操作能力。
三、醫學機能虛擬實驗在衛生職業學校實驗教學中的前景展望
(1)由于醫學機能虛擬實驗無需實驗動物,無需實驗準備即可幫助學生理解實驗的操作步驟以及實驗效果,可以作為醫學機能學實驗教學的一個有益補充。對教師而言起到輔助教學的作用,對學生而言,則起到加強知識的理解和強化作用。
(2)通過醫學機能虛擬實驗系統對醫學機能學的背景知識、實驗設備的用途、原理和操作進行大量的介紹,既開闊了學生的視野,又為學生進行探索性實驗以及自主性設計實驗提供了新的科學指導。
(3)醫學機能虛擬實驗還可以對相關醫學知識進行模擬介紹,譬如信號采集的原理和性能指標,傳感器原理及各種傳感器介紹,試驗試劑的配置,手術器械的介紹等。極大地豐富了學生的知識面,對他們今后的學習工作都起到很好的幫助作用。這也是我們傳統醫學機能實驗由于受實驗場地、實驗儀器、實驗經費等的局限所不能實現的。
參考文獻:
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【關鍵詞】 益氣活血方藥;衰老;免疫;SOD;MDA
【Abstract】Objective To observe the impact of the Formula Benefiting Qi and Activating Blood Circulation on playing different roles about antiaging and to investigate its mechanisms. Methods The model groups were established by abdomen injection with Dgal. At the same time, the model dosage groups were administered with Formula Benefiting Qi and Activating Blood Circulation according to different dosage. After treatment 50 d, the weights of spleen and thymus glands were tested, and the levels of SOD and MDA of cortex were measured. Results The weights of spleens and thymus glands of rats in the dosage groups were increased compared with those in the model group (P<0.05).Compared with those of the model group, the levels of SOD were elevated more greatly (P<0.01) and the levels of MDA were decreased(P<0.01) in the dosage groups, but the function was different. Conclusions Benefiting Qi drug and Activating Blood drug plays the different role in the antiaging aspect, using the two kinds of medicine together in a proper dosage is more potent than using only one kind.
【Key words】Formula Benefiting Qi and Activating Blood Circulation; Aging; Immunity; SOD; MDA
“氣血失調,氣虛血瘀”致衰老學說是近年來傳統醫學提出的關于衰老機制的新學說。此學說一經提出受到了醫學界的廣泛關注,一些學者也作了大量的相關研究,無論從動物實驗還是臨床實驗都證明益氣活血方藥能夠改善機體各系統器官的功能狀態從而延緩衰老〔1〕。本研究根據此學說“益氣活血”的治則和中醫“以藥效證”的原理,通過拆方,選擇益氣、活血的代表藥物作用于D半乳糖(Dgal)擬衰老大鼠模型,觀察兩種辨證在延緩衰老過程中發揮的作用,探討益氣活血法抗衰老的機制并為科學組方提供理論依據。
1 材料與方法
1.1 動物
雄性健康SD大鼠,3月齡(體重200~250 g),SPF級(由復旦大學實驗動物中心提供,許可證號:SDXK滬20020002)。將大鼠隨機分為①空白組②模型組③益氣藥大劑量組④益氣藥小劑量組⑤活血藥大劑量組⑥活血藥小劑量組⑦益氣活血大劑量組⑧益氣活血小劑量組,每組8只。
1.2 試劑
藥物:人參、黃芪、丹參、川芎(上海順天堂藥業有限公司提供)。試劑:Dgal(美國Sigma公司生產,購于上海捷貝思基因技術有限公司);丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)檢測試劑盒(購于南京建成生物工程研究所,批號:20050607)。
1.3 方法
1.3.1 藥物制備
益氣藥:人參、黃芪水提,制成濃縮液(1 ml=1 g生藥材),4℃貯存備用。活血藥:川芎、丹參,用75%濃度的乙醇回流提取〔1〕,回收乙醇,制成濃縮液(1 ml=1 g生藥材),4℃貯存備用。益氣藥+活血藥:人參、黃芪水提;川芎、丹參用75%濃度的乙醇回流提取,回收乙醇。合并濃縮液(1 ml=1 g生藥材),4℃貯存備用。Dgal溶液的制備:在天平上稱量Dgal,用生理鹽水溶解配成5% Dgal溶液。
1.3.2 模型制備
①組:腹腔注射生理鹽水0.1 ml/100 g,連續50 d;②組:腹腔注射5% Dgal生理鹽水溶液,1 ml/100 g體重,1次/d,連續50 d;③~⑧組:在②組基礎上,同時用制備好的益氣藥大劑量(4.44 g·kg-1·d-1),益氣藥小劑量(0.74 g·kg-1·d-1),活血藥大劑量(3.91 g·kg-1·d-1),活血藥小劑量(0.65 g·kg-1·d-1),益氣活血大劑量(8.34 g·kg-1·d-1),益氣活血小劑量(1.39 g·kg-1·d-1)灌胃,每10天測體重1次,調整灌胃劑量,連續50 d。
1.3.3 胸腺、脾重量的測定
最末1次給藥2 h后處死實驗大鼠,摘取胸腺、脾臟電子天平稱重。
1.3.4 大腦皮層SOD、MDA的測定
在冰臺上剝取大腦皮層,用冷生理鹽水沖洗標本,用冷勻漿介質研磨配成組織勻漿,按試劑盒所述操作。
1.4 統計學處理
數據以x±s表示,顯著性檢驗用方差分析(多個樣本均數的兩兩比較),用SPSS10.0統計軟件處理。
2 結 果
2.1 胸腺、脾臟重量的測定
與模型組相比給藥各組胸腺和脾臟重量均有增加(P<0.05)。其中益氣藥加活血藥的大劑量組的作用明顯優于其他給藥組(P<0.01)。見表1。
2.2 大腦皮層SOD、MDA的測定
與模型組相比各給藥組均顯著提高大腦皮層SOD活性(P<0.01)。其中小劑量的益氣藥加活血藥的作用優于大劑量(P<0.05),其余各給藥組之間作用無差別(P>0.05)。說明單獨使用益氣藥或活血藥均有一定的提高機體SOD活性的作用,但其效果不如二者同時使用顯著。與模型組相比給藥各組均能降低機體MDA的含量(P<0.01),但作用有差別,其中益氣藥加活血藥的作用優于其他藥物組,益氣藥加活血藥的小劑量組比大劑量組明顯,其他各給藥組之間統計學上作用無差別。見表1。表1 各組胸腺、脾臟重量、大腦皮層SOD、MDA的測定(略)
3 討 論
胸腺是免疫系統的中樞器官,對維持細胞免疫和調解免疫反應起重要作用。機體的細胞免疫、體液免疫及非特異性免疫都和脾臟有密切關系。胸腺和脾臟的功能都和其質量呈正相關性,且有增齡性萎縮的變化,模型組胸腺、脾臟的變化與此相符。因此,動態監測胸腺和脾臟的質量可用于機體免疫功能的評價〔2〕。通過該實驗對比觀察發現益氣藥和活血藥在“益氣活血”法延緩衰老中發揮著不同效用,益氣藥對免疫器官的影響大于活血藥,主要表現為使胸腺、脾臟增重明顯。益氣活血藥合用的效果優于單獨使用益氣藥。益氣活血藥對免疫器官的增重作用表明二者對提高免疫力,延緩衰老有明顯效果。益氣活血藥對免疫功能的影響主要表現為細胞免疫還是體液免疫有待進一步的研究。
大鼠大量連續注射Dgal,可出現與自然衰老相似的改變,并證實Dgal誘發的自由基氧化應激損傷是擬衰老的主要原因,可引起體內尤其是腦組織內自由基含量升高〔3〕。大腦皮層SOD、MDA可以反映大腦自由基產生和老化程度,從而反映大腦的功能狀態。實驗表明,模型組大鼠大腦皮層SOD活性降低,MDA含量升高,說明衰老大鼠確實存在自由基代謝紊亂,抗氧化系統功能降低,氧化產物增加。單獨使用益氣藥或活血藥對提高SOD活性,減少MDA的作用都不如二者共同使用效果明顯,且小劑量的益氣加活血藥比大劑量作用強。這說明適當的劑量才能使抗氧化與氧化系統達到平衡,方藥中為加大療效一味增加君藥劑量是不可取的。其機制可進一步從細胞分子水平分析。
總之,合理適量搭配益氣、活血藥可以提高機體免疫力,改善自由基代謝從而達到延緩衰老的目的。由于衰老是機體復雜綜合的生理現象,故益氣活血方藥的抗衰老作用一定還有更廣泛的內在聯系,有待進一步的研究。
參考文獻
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[關鍵詞] 子宮內膜異位癥;GnRH-a治療;激素水平;基因表達
[中圖分類號] R713.6 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210(2015)07(b)-0072-04
[Abstract] Objective To analyze the effect of preoperative GnRH-a treatment on serological indexes and gene expression related to endometrial tissue of patients with endometriosis. Methods 82 cases of endometriosis patients from December 2012 to December 2014 in Hu'nan Provincial People's Hospital were selected as research objects, according to random indicator method, they were divided into observation group and control group, 41 cases in each group. Patients of the observation group received preoperative GnRH-a combined laparoscopic treatment, and patients of the control group were treated with pure laparoscopic. The hormone levels, disease related indicators and recurrence of related indicators, endometrial tissue gene expression of two groups were compared. Results E2, FSH, P, LH levels of patients in the observation group after treatment were significantly lower than those of the control group, the differences were statistically significant (P < 0.05); CA125, CA199 and TIMP-1,VEGF of patients in the observation group after treatment were significantly lower than those of the control group, the differences were statistically significant (P < 0.05); expression levels of eNOS, CD34, LIvin in the observation group were significantly lower than those of the control group, the differences were statistically significant (P < 0.05). Conclusion Preoperative GnRH-a treatment helps to reduce the hormone levels in patients with endometriosis, is good for removed completely under laparoscopic surgery, and reduces the possibility of postoperative recurrence.
[Key words] Endometriosis; GnRH-a treatment; Hormone levels; Gene expression
子宮內膜異位癥(endometriosis,EMs)是臨床痛經及不孕的主要原因之一,是指內膜細胞種植在不正常位置而形成的一種女性常見婦科疾病,好發于24~40歲的育齡期女性,患者可表現出痛經、月經異常、不孕等臨床癥狀。一般認為病變體積較大或者發生在其他部位的子宮內膜異位結節,體積在2 cm以上者,不易用藥物控制病情,需手術治療,而目前腹腔鏡手術是首選的治療方式。由于重度EMs病變廣泛,可以伴有嚴重粘連,增加腔鏡下分離及清除病灶的難度,可能會造成病灶遺留,增加術后復發概率、降低手術治療效果[1]。促性腺激素釋放激素激動劑(GnRH-a)是目前認為可以顯著增加腹腔鏡手術效果,降低手術難度的藥物,其被稱為“藥物性卵巢切除”,使用后早期可以使患者體內激素水平達到類絕經期水平,迅速縮小病灶,增加腹腔鏡手術切除異位內膜的徹底性[2]。本研究主要分析術前GnRH-a治療對子宮內膜異位癥患者血清學指標及內膜組織相關基因表達的影響,具體報道如下:
1 資料與方法
1.1 一般資料
選擇2012年12月~2014年12月于湖南省人民醫院接受住院治療的EMs患者82例為研究對象,均具有典型癥狀且影像學檢查見低回聲暗區的盆腔包塊,所有患者及家屬在了解研究過程后均簽署知情同意書。按照隨機數字表法將所有入組患者分為觀察組及對照組,每組各41例。觀察組患者年齡29~46歲,平均(37.28±4.81)歲,病程4~28個月,平均(7.12±0.74)個月;對照組患者年齡30~45歲,平均(36.15±4.63)歲,病程6~26個月,平均(7.57±0.93)個月。兩組患者的基線資料比較,差異無統計學意義(P > 0.05),具有可比性。
1.2 治療方法
兩組患者均接受腹腔鏡手術治療,建立CO2氣腹后置入相關器械,術中行盆腔全面探查,松解盆腔粘連,伴巧克力囊腫者行卵巢表面打孔并吸凈其中巧克力樣液體、剝離囊腫。對于較小病灶可以直接切除,部分患者需行輸卵管造口及成形術。觀察組患者在腹腔鏡手術前接受GnRH-a治療,具體如下:月經第1天肌內注射GnRH-a 3.6 mg,以后每月1次,持續3個月經周期。對照組患者單純接受腹腔鏡子宮異位內膜剝離治療,圍術期不添加其他藥物。
1.3 觀察指標
1.3.1 激素水平 接受不同治療前后,抽取患者外周靜脈血,采用放射免疫法測定血清雌二醇(E2)、卵泡雌激素(FSH)、孕激素(P)、黃體生成素(LH)等水平。
1.3.2 疾病相關指標及復發相關指標 接受不同治療前后,抽取患者外周靜脈血,采用酶聯免疫吸附法測定疾病相關指標CA125、CA199,復發相關指標基質金屬蛋白酶抑制劑-1(TIMP-1)、血管內皮生長因子(VEGF)水平。
1.3.3 內膜組織基因表達 治療前及術中均留取子宮內膜組織,測定其中內皮型一氧化氮合成酶(eNOS)、CD34、LIvin蛋白的表達情況。
1.4 統計學方法
采用SPSS 18.0統計學軟件進行數據分析,計量資料數據用均數±標準差(x±s)表示,兩組間比較采用t檢驗;計數資料用率表示,組間比較采用χ2檢驗,以P < 0.05為差異有統計學意義。
2 結果
2.1 激素水平
治療前兩組患者的血清激素水平差異無統計學意義(P > 0.05),治療后兩組患者的激素水平均低于治療前,且觀察組患者的E2、FSH、P、LH水平明顯低于對照組,差異均有統計學意義(P < 0.05)。見表1。
2.2 疾病相關指標及復發相關指標
治療前兩組患者疾病相關指標及復發相關指標值差異無統計學意義(P > 0.05),兩組患者治療后的疾病相關指標及復發相關指標值低于治療前,且觀察組患者的CA125、CA199、TIMP-1、VEGF水平均顯著低于對照組,差異均有統計學意義(P < 0.05)。見表2。
2.3 內膜組織基因表達
療前兩組患者內膜組織基因表達值差異無統計學意義(P > 0.05),治療后兩組患者的內膜組織基因表達值均低于對照組,且觀察組患者的eNOS、CD34、LIvin表達水平顯著低于對照組,差異均有統計學意義(P < 0.05)。見表3。
3 討論
EMs是一種臨床常見雌激素依賴性疾病,主要癥狀包括盆腔疼痛、不孕以及盆腔包塊,多發生于育齡期婦女,也是目前臨床不孕癥的主要病因之一。腹腔鏡手術以其小創傷、少并發癥等優勢成為治療EMs的首選方式,單純的腹腔鏡手術治療雖然可以切除病灶,但是對于術后復發、殘留深部病灶等問題難以解決,需聯合藥物治療以提高治療效果[3-4]。GnRH-a屬于人工合成的十肽類化合物,與垂體GnRH受體親和力強,活性較天然GnRH高50~100倍,可以促進垂體細胞釋放LH及FSH[5]。GnRH-a用藥后以跟高的親和力率先占用GnRH受體并移入細胞內,除了首次給藥后點火效應導致的LH、FSH短暫增高,其后導致細胞膜GnRH受體缺乏,FSH、LH分泌急劇降低,卵泡發育停止,最終體內雌孕激素水平顯著降低,造成體內激素水平處于類絕經狀態、促進異位子宮內膜萎縮凋亡[6]。1982年Meldrum首次提出將GnRH-a用于EMs治療,目前較多研究也已經證實GnRH-a可以有效緩解EMs患者臨床癥狀,結合單純腹腔鏡手術可能造成的子宮異位內膜殘留的實際,目前較多學者提出可以將GnRH-a與腹腔鏡組成聯合治療方式用于EMs患者的治療,但是此方法的臨床效果研究多停留于實驗階段,相關臨床報道仍較少[7]。
在本次研究中重點分析了GnRH-a應用與否給患者帶來的臨床治療效果差異,主要比較在血清學及子宮內膜基因表達方面的影響。在患者激素水平方面,治療前兩組患者的血清激素水平差異無統計學意義,觀察組患者在腹腔鏡手術之前應用了GnRH-a,結果發現其術后E2、FSH、P、LH水平明顯低于對照組,E2、FSH、P、LH的水平可以直接反應患者的卵巢功能狀態,上述結果提示GnRH-a應用后對卵巢的功能抑制作用十分強烈。GnRH-a可以很好的調節垂體分泌作用,也被成為“暫時藥物性卵巢切除”,足見其對用藥后短期內對卵巢功能抑制的徹底性,與上述結果中各項血清激素水平大幅降低至絕經期水平吻合,通過顯著降低患兒激素水平來迅速縮小病灶體積,為后續腹腔鏡手術操作創造有利條件,從而達到手術切除徹底及減少術后復發的作用[8-9]。
腫瘤標志物CA199為許多黏膜細胞的組成成分,目前廣泛應用于消化系統腫瘤診斷及治療監測,近年來其在婦產科疾病中的價值已經越來越受到重視,許多學者已經將CA199作為卵巢惡性腫瘤的輔助診斷指標[10]。CA125對于EMs的診斷具有參考價值,在月經期其水平會升高,故在EMs患者中其水平將顯著上升。EMs病灶組織與腫瘤細胞的生長方式極為類似,故TIMP-1、VEGF均可作為子宮內膜侵襲轉移能力的客觀指標,用于判斷治療后的復況[11]。上述結果顯示治療前兩組患者的各項指標水平無統計學差異,觀察組患者治療后的CA125、CA199、TIMP-1、VEGF水平均顯著低于對照組,可見GnRH-a聯合腹腔鏡手術可以更為徹底的切除病灶,也為減少遠期疾病復發奠定了良好的基礎[12]。
近年來的理論認為,GnRH-a不僅可以通過經典途徑(垂體分泌效應)抑制內膜細胞生長,還能夠直接作用于內膜細胞本身發揮作用[13-14]。CD34為血管內皮細胞的特異性標志物,可以反映子宮內膜新生毛細血管的生長情況,其水平越高水平新生毛細血管越豐富[15]。已經有研究發現正常子宮內膜與異位子宮內膜中均有CD34表達,但是異位子宮內膜中的CD34表達量明顯更為豐富,說明異位子宮內膜具有更強的種植生長能力。eNOS主要分布于神經細胞及內皮細胞中,為生理情況下合成NO的主要來源,已經有研究證實在EMs患者的子宮內膜上皮中,eNOS表達較正常子宮內膜明顯增高。Livin是凋亡抑制蛋白家族的新成員,可以參與細胞凋亡的調控[16-17]。Livin在正常成人的多數終末組織中低表達或者不表達,而在惡性腫瘤組織中則呈高表達,可以阻斷細胞凋亡的過程。Alvarado-Díaz等[18]的研究中顯示Livin蛋白主要表達于子宮內膜腺上皮細胞的細胞質,在異位子宮內膜中呈高表達。上述研究結果顯示,治療前兩組患者的eNOS、CD34、LIvin表達水平均較高,治療后均有所降低,但是觀察組患者的上述指標值降低幅度明顯高于對照組,可見GnRH-a聯合腹腔鏡手術可以更為有效的抑制異位子宮內膜的生長并促進其凋亡,治療效果較單純腹腔鏡手術更為徹底。
綜上所述,術前GnRH-a治療有助于降低EMs患者的激素水平,有利于腹腔鏡手術的病灶徹底切除,同時降低術后復發可能性,值得在日后臨床實踐中推廣應用。
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[中圖分類號] R192.3[文獻標識碼] B[文章編號] 1005-0515(2011)-11-289-01
醫學影像學自德國物理學家倫琴發現X線以來僅100余年的歷史,影像學發展卻相當迅速,尤其是近30年來,CT、MR、超聲、PET等新技術不斷涌現,使其在臨床應用的范圍不斷擴大,已成為醫學領域中發展最快的學科之一,而醫學影像學課程建設及有關影像學專業人才培養問題也日益受到重視。
傳統影像學專業的人才培養目標不是培養單純以影像技術為主的專業技術人才就是培養單純以臨床診斷為主的專業診斷人才。隨著影像技術及現代影像設備的飛速發展,尤其是介入治療的發展和普遍應用,現代醫學影像學已由原來的臨床輔助檢查技術轉變成為與內科、外科并列的第三大臨床治療技術。中國工程院院士劉玉清教授在報告中說,21世紀醫學影像學的發展方向是由以大體形態學為主向生理、功能、代謝和基因成像過渡。因此,現代醫學影像學專業人才要求既有影像學的專業知識和實踐能力也要有堅實的臨床理論及臨床思維能力。專業發展方向的轉型對影像專業人才的要求也有了改變。多年的臨床經驗告訴我們單純的技術人才和單純的診斷人才都是不能適應現代影像學發展的需求。我校根據現代醫學影像學發展的趨勢及目前醫院對影像專業人才的特殊要求,結合我校的實際情況進行調研及論證,在原來的四年制醫學影像學專業的基礎上增設了五年制臨床醫學(影像方向)專業,并研究制定出新的人才培養方案。此方案的培養目的是培養集影像技術與臨床診斷于一體的綜合性專業人才。
1 培養目標的改變 四年制醫學影像學專業的培養目標是:培養適應現代化建設需要的德、智、體、美全面發展,具有較扎實的專業基本理論和基本技能,較強的實踐能力和創新意識,面向基層醫療衛生單位,能從事醫學影像技術工作的高級應用型專門人才。
五年制臨床醫學(影像方向)專業培養目標是:培養適應現代化建設需要的德、智、體、美全面發展,具有基礎醫學、臨床醫學、醫學影像學專業基本知識、基本理論和基本技能,較強實踐能力、科研能力和創新意識,面向基層醫療衛生單位,能在醫學領域從事影像技術及診斷工作的高素質應用型專門人才。
新專業的培養目標是培養面向基層醫療衛生單位,能在醫學領域從事影像技術及診斷工作的高素質應用型專門人才。是因為基層醫療衛生單位的影像科不像上級醫院有專門的影像診斷專業人才和影像技術人才,在基層醫院因為人員少,往往沒有區分,大都需要“雙肩挑”。因此沒有過硬的醫學影像技術和臨床診斷知識是不受歡迎的。因此新的培養目標是適應基層醫療單位對醫學影像學人才的需求的。
2 課程設置的改變 在課程設置方面改變了原來的“公共基礎課專業基礎課臨床專業課影像專業課影像專業見習實習”的模式,采用的是“公共基礎課專業基礎課臨床專業課臨床專業見習實習影像專業課影像專業見習實習”的模式。學生進校后首先學習公共基礎課,增強他們的人文素養,然后依次學習專業基礎課和臨床專業課,接著下附屬醫院見習實習臨床專業,再返校學習專業課,最后下附屬醫院進行專業見習實習。
從課程順序上我們不難看出,新的培養方案在學習專業課之前增設了一階段的臨床專業見習實習。學生接受了一定的臨床經驗及臨床思維方式的培養,再來學習專業知識,學生們無論是學習態度還是學習方法都會有驚人的轉變,理論結合臨床,學起來有的放矢,事半功倍。
3 課時設計的改變 公共基礎課基本沒變,學科基礎課總學時增加了三百余學時,專業課總學時增加了近兩百學時,其中增加的部分主要為臨床專業基礎課及臨床專業課,影像專業課增設了一門《醫學影像圖像處理》。隨著PACS建設的逐步普及并與HIS、RIS的整合,影像科和整個醫院的工作流程發生了很大的變化。PACS建成后可逐步做到無片化和無紙化,使影像學信息非常方便地在網上傳輸、并進行會診和教學病例討論,使圖像信息資源得到充分的共享,因此增加臨床專業知識及影像圖像知識勢在必行。
4 學位授予的改變 四年制醫學影像學專業的培養目標是培養從事醫學影像技術工作的高級應用型專門人才,是技術類專業,因此學位授予的是理學學士。五年制臨床醫學(影像方向)專業培養目標是培養能在醫學領域從事影像技術及診斷工作的高素質應用型專門人才,是醫療專業,因此學位授予的是醫學學士。授予理學學士的畢業生日后只能考取技師類執照,從事技術類工作。而授予醫學學士的畢業生日后可以考取醫師類執照,就業范圍遠遠大于授予理學學士的畢業生。我校在07級的學生中就逐步開始實行這種新的專業培養方案,迄今為止,無論是就業還是招生,五年制臨床醫學(影像方向)專業的前景都要優于四年制醫學影像學專業。
參考文獻