去卵巢小鼠學習記憶能力探析

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【摘要】目的觀察去卵巢（OVX）小鼠學習記憶能力及腦超微結構的改變。方法12只雌性C57BL／6小鼠隨機分為假手術組（SHAM組），去卵巢組（OVX組），造模后繼續喂養12w。采用Morxi＾JC迷宮測試認知能力，透射電鏡檢測小鼠大腦超微結構的改變。結果與SHAM組對比，OVX組小鼠的逃避潛伏期顯著增加（P＜〇．〇5），穿越平臺次數顯著減少（P＜0．05）；0VX組小鼠海馬神經元出現明顯的超微結構改變，包括核膜破裂、核仁邊界不清；線粒體數量減少、體積增大；高爾基體腫脹變大等。結論0VX小鼠的學習記憶能力下降，可能與海馬超微結構的改變有關。

【關鍵詞】去卵巢小鼠；海馬；超微結構

更年期最常見的癥狀之一是認知障礙和記憶障礙。先前的研究已經表明，隨著絕經后雌激素水平的降低，老年癡呆癥和記憶損害的風險會增加［1］。卵巢切除術后，由于雌激素缺乏，小鼠的學習和記憶受影響［3］。因此本實驗觀察去卵巢小鼠（ovariectomized，0VX）學習記憶能力及大腦海馬神經元超微結構的變化，探討絕經后發生認知減退的可能機制。

1資料與方法

1．實驗動物、試劑與儀器

12只健康，12wC57BL／6雌性小鼠，由西安交通大學實驗動物中心提供。3％戊二醛（廣州市化學試劑廠），Morris7jC迷宮（上海吉量科技公司），透射電鏡（JEM－1400，日本）。

2．動物分組及模型制備

手術操作按參考文獻［4］進行，手術前禁食12h，腹腔注射1％戊巴比妥鈉麻醉小鼠，俯臥位固定，消毒；手術組，摘除卵巢。假手術組在沒有切除卵巢的情況下，進行了同樣的手術。實驗過程符合西安醫學院倫理委員會指定的實驗動物倫理學要求。3．Morris水迷宮實驗術后喂養12w，兩組小鼠進行Morris水迷宮實驗，上下午各2次，兩組小鼠分別從4個不同的人水點放人水中，記錄兩組小鼠尋找平臺所需的時間（2min內）。撤除平臺，將兩組小鼠從任一入7jC點放入7jC池，記錄跨越平臺的次數（lmin內）。

4．小鼠海馬蘇木精－伊紅染色

固定標本蘇木精浸泡5min，2次，7jC洗30s，伊紅溶液浸泡30s，梯度乙醇脫水，透明處置，封片，倒置光學顯微鏡觀察和拍片。

5．海馬組織電鏡觀察

將切割成1mm3的小鼠海馬組織置于3％戊二醛溶液中。41；處置2h，PBS溶液漂洗，置于1％四氧化鋨溶液中41固定，梯度醇脫水，置換，浸泡，包埋，聚合，光學顯微鏡定位，超薄切片，醋酸鈾、檸檬酸鉛染色，透射電子顯微鏡觀察、照相。

6．統計學方法

采用SPSS21．0統計軟件，用（元±s）來表示數據。采用配對i檢驗，以P＜〇．〇5為差異有統計學意義。

2結果

1．Morris水迷宮實驗結果（表）

結果顯示0VX組逃避潛伏期為（23．554．21）s，顯著長于SHAM組（12．793．26）s，（P＜0．05）；0VX小鼠跨越平臺次數為（1．890．78）次，顯著少于SHAM組（5．980．99）次，（iM）＿05）。

2．小鼠海馬病理改變比較（圖1）

通過蘇木精－伊紅染色觀察，SHAM組小鼠海馬CA1區神經元結構完整清晰、排列整齊、層次清晰，呈3￣5層；0VX組海馬CA1區神經元數量減少、層次不清，層數減少，細胞松散，間隙增加。

3．小鼠海馬神經元超微結構的改變（圖2）

SHAM組小鼠海馬神經元超微結構無異常改變。0VX組海馬神經元出現明顯的病理性超微結構改變，包括核膜破裂、核仁邊界不清、周圍間隙增大；線粒體數量減少、體積增大；高爾基體腫脹變大等。

3討論

衰老會影響認知功能的各個方面，隨著年齡的增長，認知能力下降的風險也會增加。有證據表明，隨著年齡的增長，記憶等認知功能會受到影響，這可能與大腦某些區域的神經元喪失有關［5＜。一般來說，大多數患有阿爾茨海默病的患者是女性，而且女性患認知障礙的風險比男性高。盡管這種差異可能與女性壽命的延長有關，但絕經期雌激素的急劇下降也可能導致這種情況。研究顯示長期喪失卵巢功能可顯著增加神經系統疾病引起癡呆和死亡的風險［7＿11］0本文通過Morris水迷宮實驗發現，0VX組小鼠的逃避潛伏期增加，跨越平臺次數減少；說明去卵巢后，由于雌激素缺乏，小鼠的學習和記憶均受損，與之前的研究一致［12＿13］。蘇木精－伊紅染色發現0VX組小鼠海馬CA1區神經元呈現層次不清、排列紊亂、神經元數量減少、細胞松散、層數變少等病理性改變，該結果與Guan及Ma的實驗研究結果一致［14＿＇透射電子顯微鏡觀察結果顯示，0VX組海馬神經元細胞器出現明顯的超微結構病變，表現為核膜破裂、核仁邊界不清；線粒體數量減少、體積增大；高爾基體腫脹變大、空泡等。OVX組神經元結構的病理改變及神經元細胞器超微結構的改變，可能是導致OVX組小鼠學習記憶能力受損的重要原因之一。綜上所述，本研究發現OVX小鼠的學習記憶能力下降，可能與海馬超微結構改變有關。

作者:魏明 田甜 劉鵬 甘露 單位:陜西省人民醫院婦科