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摘要:水產(chǎn)品中硝基呋喃類代謝物殘留會(huì)通過(guò)食物鏈富集作用對(duì)人體健康產(chǎn)生危害,我國(guó)規(guī)定在動(dòng)物源性食品中不得檢出硝基呋喃類代謝物,但數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)顯示仍有人為利益而使用該類藥物。為保證百姓餐桌安全,避免大型儀器檢測(cè)的滯后性,建立有效、簡(jiǎn)便、適合現(xiàn)場(chǎng)操作的快速檢測(cè)技術(shù)十分必要。對(duì)水產(chǎn)品中硝基呋喃類代謝物快速檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行探討,以期為水產(chǎn)品快速檢測(cè)發(fā)展提供技術(shù)支持。
關(guān)鍵詞:水產(chǎn)品;硝基呋喃類代謝物;快速檢測(cè)技術(shù);應(yīng)用
硝基呋喃類藥物是一類人工合成的具有5-硝基呋喃環(huán)的廣譜抗生素,常見(jiàn)的有以下4種:呋喃唑酮(AOZ)、呋喃它酮(AMOZ)、呋喃西林(SEM)和呋喃妥因(AHD)。我國(guó)農(nóng)業(yè)部第235號(hào)公告《動(dòng)物性食品中獸藥最高殘留限量》中規(guī)定在動(dòng)物源性食品中不得檢出硝基呋喃類代謝物,美國(guó)、日本、韓國(guó)和歐盟等國(guó)家同樣規(guī)定在動(dòng)物源性食品中不得檢出。但到目前為止,仍有水產(chǎn)品中檢出硝基呋喃類藥物及其代謝物的報(bào)道出現(xiàn)。這不僅危害人類身體健康,也影響水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展,同時(shí)給國(guó)家水產(chǎn)品出口帶來(lái)巨大經(jīng)濟(jì)損失。為了保障百姓餐桌安全,維護(hù)國(guó)家利益,建立現(xiàn)行有效、方便現(xiàn)場(chǎng)操作的檢測(cè)技術(shù)十分必要。本文主要對(duì)水產(chǎn)品中硝基呋喃類代謝物快速檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行探討,為今后快速檢測(cè)發(fā)展提供技術(shù)支持。
1硝基呋喃類代謝物的危害及作用原理
硝基呋喃類藥物作用于微生物酶系統(tǒng),通過(guò)抑制乙酰輔酶A,干擾微生物糖類的代謝,起到抑菌作用,可殺滅大多數(shù)革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌、真菌和原蟲等病原體,因而曾經(jīng)廣泛應(yīng)用于畜禽及水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)[1]。研究發(fā)現(xiàn),硝基呋喃類代謝物可使試驗(yàn)動(dòng)物誘發(fā)癌變和基因突變[2]。硝基呋喃類藥物對(duì)光敏感,半衰期很短,在動(dòng)物體內(nèi)能迅速代謝,原型藥物很快就降至檢出限以下;而其與蛋白結(jié)合態(tài)的代謝產(chǎn)物則可穩(wěn)定存在數(shù)月,常用的食品烹飪方法如蒸煮、烘烤和微波加熱等均無(wú)法使代謝物降解。所以,殘留檢測(cè)以代謝物作為指示該類藥物殘留的標(biāo)識(shí)物。硝基呋喃類物質(zhì)均為性質(zhì)穩(wěn)定的黃色粉末,無(wú)味或微苦味。AOZ幾乎不溶于水和乙醇;SEM難溶于水,微溶于乙醇;AHD幾乎不溶于水,微溶于乙醇。硝基呋喃類原型藥物在生物體內(nèi)代謝迅速,其代謝產(chǎn)物3-氨基-2-惡唑烷基酮(AOZ)、5-甲基嗎啉-3-氨基-2-惡唑烷基酮(AMOZ)、氨基脲(SEM)和1-氨基-2-內(nèi)酰脲(AHD)能與蛋白質(zhì)結(jié)合,形成比原藥化合物更穩(wěn)定的蛋白結(jié)合物,故常利用代謝物的檢測(cè)來(lái)反應(yīng)硝基呋喃類藥物的殘留狀況。此類蛋白結(jié)合物可以在弱酸性條件下水解,從蛋白質(zhì)中釋放出來(lái)被人體吸收,進(jìn)而對(duì)人體造成危害[3]。
2水產(chǎn)品快速檢測(cè)技術(shù)研究的意義
硝基呋喃類代謝物常用的檢測(cè)方法有色譜分析法和免疫分析法。色譜分析法包括高效液相色譜法和液—質(zhì)聯(lián)用法,具有靈敏度高、重復(fù)性和準(zhǔn)確性好等優(yōu)點(diǎn),但是前處理過(guò)程相對(duì)復(fù)雜,時(shí)間較長(zhǎng),對(duì)人員要求較高,而且儀器設(shè)備價(jià)格高昂,普及難度大,存在滯后性,不適合日常監(jiān)管。免疫分析法包括酶聯(lián)免疫法和膠體金免疫層析法,操作相對(duì)簡(jiǎn)單,而且用時(shí)較短,技術(shù)便于掌握,缺點(diǎn)是容易出現(xiàn)假陽(yáng)性,適用于大批量樣品的初篩工作。目前,我國(guó)水產(chǎn)行業(yè)規(guī)模較大,分布零散,難于集中管理,水產(chǎn)品中的硝基呋喃類代謝物等藥物殘留并不能通過(guò)肉眼直接辨別出來(lái),如果能在現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行快速檢測(cè),初篩出疑似樣品,然后將疑似樣品通過(guò)色譜技術(shù)進(jìn)一步驗(yàn)證,可以縮短檢測(cè)周期,提高工作效率,促進(jìn)政府部門對(duì)水產(chǎn)品行業(yè)及時(shí)有效的監(jiān)管。
3水產(chǎn)品硝基呋喃代謝物快速檢測(cè)技術(shù)原理
3.1酶聯(lián)免疫法酶聯(lián)免疫法(ELISA)是一種將抗原抗體免疫反應(yīng)的特異性和酶的高效催化作用有機(jī)結(jié)合的一種應(yīng)用技術(shù),可進(jìn)行定性和定量檢測(cè)。ELISA可快速檢測(cè)水產(chǎn)品中AOZ和AMOZ[4],在相關(guān)研究報(bào)道中,由于硝基呋喃代謝物分子量較小、免疫原性較低,已報(bào)道的硝基呋喃代謝物的實(shí)際樣品檢測(cè)大多基于衍生檢測(cè)方法。
3.2膠體金免疫層析法目前最常用于快速檢測(cè)4種硝基呋喃類代謝物(AOZ,AMOZ,SEM,AHD)的技術(shù)是膠體金免疫層析法,國(guó)內(nèi)已有多家生物技術(shù)公司研制生產(chǎn)膠體金試紙條快速檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品[5]。其靈敏度高,操作簡(jiǎn)便,檢測(cè)快速,缺點(diǎn)是不能實(shí)現(xiàn)在線檢測(cè)和多殘留同時(shí)檢測(cè),且會(huì)存在假陽(yáng)性和假陰性。膠體金免疫層析法是膠體金標(biāo)記技術(shù)和免疫層析技術(shù)結(jié)合的應(yīng)用形式,以膠體金作為示蹤物,應(yīng)用于抗原抗體反應(yīng)的一種新型免疫標(biāo)記技術(shù)。若待測(cè)樣品中含有硝基呋喃代謝物(抗原物質(zhì)),則與金標(biāo)抗體相結(jié)合,阻止金標(biāo)抗體與纖維素膜上的偶聯(lián)物結(jié)合,使T線顯色較弱,甚至不顯色,結(jié)果為陽(yáng)性;若待測(cè)樣品中沒(méi)硝基呋喃代謝物(抗原物質(zhì)),則不能阻止金標(biāo)抗體與纖維素膜上的偶聯(lián)物結(jié)合,從而T線顯色較強(qiáng),呈紅色,結(jié)果為陰性。
4快速檢測(cè)技術(shù)展望
隨著百姓餐桌日益豐富,食品安全問(wèn)題已經(jīng)成為重中之重。快速檢測(cè)技術(shù)具有用時(shí)短、耗材少、易掌握等優(yōu)點(diǎn),將其應(yīng)用于市場(chǎng)監(jiān)管必然會(huì)成為今后的發(fā)展趨勢(shì)。據(jù)報(bào)道,快速檢測(cè)技術(shù)在上海已經(jīng)開始實(shí)施應(yīng)用,并成立了首個(gè)食品快速檢測(cè)站,對(duì)消費(fèi)者免費(fèi)開發(fā),對(duì)快速檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)的不合格樣品,將進(jìn)行追蹤溯源和抽樣復(fù)檢。劉歡等人對(duì)市場(chǎng)現(xiàn)有的3種硝基呋喃類代謝物快速檢測(cè)產(chǎn)品進(jìn)行試驗(yàn),其中一種產(chǎn)品對(duì)AOZ,AMOZ,SEM,AHD檢出率為100%,且兩個(gè)不同批次產(chǎn)品的檢測(cè)結(jié)果一致;另外兩種產(chǎn)品存在假陽(yáng)性,且不同批號(hào)間產(chǎn)品的穩(wěn)定性有差異。因此,用快速檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)水產(chǎn)品中硝基呋喃類代謝物時(shí),有必要對(duì)其最低檢出限、假陽(yáng)/陰性率、穩(wěn)定性等參數(shù)進(jìn)行驗(yàn)證,確保產(chǎn)品符合標(biāo)準(zhǔn)后,方能用于批量樣品檢測(cè)工作,以便更好地服務(wù)于日常監(jiān)管工作。
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作者:張瑩瑩 單位:沈陽(yáng)市農(nóng)業(yè)監(jiān)測(cè)總站