老年醫學課題研究精選(九篇)

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第1篇：老年醫學課題研究范文

1  臨床資料

    選取在本院專科門診就診收入院的中風后抑郁癥患者60例為研究對象。入組標準：均經本院神經內科通過頭顱ct或mri檢查,確診為腦中風患者；符合icd-10診斷標準,漢密頓抑郁量表(hamd)17項總分≥18,既往未經過抗抑郁治療；排除意識障礙、失語患者。患者年齡46～82歲,平均(66.4±10.5)歲。將60例患者按就診順序隨機分為西藥加服中藥治療組(觀察組)和單純西藥治療組(對照組),每組30例。觀察組：男9例,年齡(65.5±15.8)歲；女21例,年齡(66.9±12.6)歲。對照組：男10例,年齡(65.9±14.3)歲；女20例,年齡(66.7±13.0)歲。2組在性別、年齡、文化程度、病程及hamd初始評分方面差異均無統計學意義(p＞0.05)。

2  方法

2.1  治療方法

    對照組：服用氟西汀片,每日20 mg。觀察組：在對照組抗抑郁西藥常規治療的基礎上,加服自擬解郁湯。解郁湯基本方藥組成：黨參、川芎、當歸、丹參、香附、合歡皮、瓜蔞、郁金等,均為中藥配方顆粒(深圳市三九現代中藥有限公司生產)。服用方法：將各種中藥配方顆粒一同置于水杯中,加入約300 ml開水使溶解,待溫后分早晚2次服用。

   

2組同時實施腦中風的治療,由本院神經內科制定治療方案。用藥至第4周末評定療效。

2.2  觀察指標與方法

   

①于治療前以及治療第1、2、3、4周末各評定1次hamd；②在入組前及治療第4周末進行血常規、尿常規、肝功能、腎功能及心電圖檢查。

    以hamd減分率評定療效,采用痊愈、顯著進步、進步、無效4級評分標準,減分率≥75%為痊愈,50%～74%為顯著進步,25%～49%為進步,＜25%為無效。總有效率(%)＝[(痊愈＋顯著進步＋進步)/總例數]×100%

2.3  統計學方法

    應用spss13.0統計軟件進行統計分析,把數據輸入計算機。計量資料進行t檢驗,計數資料進行χ2檢驗及ridit分析。 

3  結果

  

療程結束后觀察組總有效率達93.3%,對照組總有效率達80.8%,2組比較差異有統計學意義(p＜0.05),見表1。2組治療前后hamd評分變化見表2、表3。2組治療前后血常規、尿常規、肝功能、腎功能及心電圖檢查均無異常改變,也無血壓升高現象。表1  2組中風后抑郁癥患者療效比較（略）表2  2組中風后抑郁癥患者治療前后hamd評分總分比較（略）注：與對照組同一時間比較,*p＜0.05表3  2組中風后抑郁癥患者治療前后hamd評分減分情況（略）注：與對照組治療后比較,p＜0.05

 

4  討論

   

抑郁癥已經成為中風后常見的并發癥,尤其是老年患者更易發生。中風后發生抑郁,有人認為是心理因素,但更多學者認為是人體的神經生化機制起重要作用。筆者認為,首先是中風后抑郁癥的發生與大腦損害引起的去甲腎上腺素和5-羥色胺(5-ht)之間的平衡失調有關,致使情緒調節通路受到破壞,即破壞了去甲腎上腺素能神經元和5-ht能神經元及通路,使神經遞質去甲腎上腺素和5-ht合成減少而導致抑郁[1]；其次是中風后肢體癱瘓導致患者生活自理能力和社會適應能力減退,使生活質量下降而產生抑郁[2]。抑郁癥屬于情感障礙類精神系統疾病,主要表現為情緒低落、思維遲鈍和語言動作減少等,中醫多歸屬于“郁證”、“癲證”等范疇。氟西汀是一種新型選擇性5-ht再攝取抑制劑,可有效改善腦血液循環,有效地激活腦內神經突軸間隙5-ht的平衡水平,使患者在短期內消除癥狀。對于首發抑郁癥患者,臨床療效優于傳統的三環類抗抑郁藥。

   

中醫治療抑郁癥方法頗多,效果良好,且不良反應少,患者易于接受。在應用西藥的基礎上,加用中藥單方治療[3]、中藥單方加減治療[4-6]、中醫辨證施治[7-9]、中成藥治療[10]、針灸治療[11-12]、走罐治療[13]等,療效均高于單純應用西藥。臨床上根據其表現及舌脈,一般將其分為肝氣郁結證、氣郁化火證、痰氣郁結證、心脾兩虛證等。筆者根據中西醫結合治療抑郁癥的臨床經驗,將各證常用藥物進行分析比較,選取黨參、川芎、當歸、丹參、香附、合歡皮、瓜蔞、郁金等組成為臨床治療抑郁癥的固定方劑——解郁湯。臨床應用結果表明,患者在服用西藥的基礎上加服中藥解郁湯,治療效果顯著提高,不良反應大大減少,提高了患者治療的依從性。黨參補中益氣；川芎活血祛瘀、祛風止痛；當歸補血調經、活血止痛；丹參活血祛瘀、涼血清心、養血安神；香附疏肝理氣、活血調經；合歡皮安神活血；瓜蔞清肺化痰、寬胸散結、潤燥滑腸；郁金活血止痛、疏肝解郁、涼血清心。以上藥物共奏疏肝解郁調神、行氣瀉火安神、化痰開竅、補中養心之功,從而達到了治療抑郁癥的良好效果。

   

抑郁癥患者往往伴有一些生物性節律改變,如睡眠障礙、食欲不振、便秘、口干、身體乏力、精力減退、性功能障礙等,這些生理癥狀用抗抑郁藥很難解決,甚至一些抗抑郁藥還帶來上述不良反應,而中藥在這方面具有獨到之處,在本項課題及筆者以往的課題研究中均已得到證實。

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第2篇：老年醫學課題研究范文

【摘要】

目的研究人參水提物（water extracts of Ginseng， WEG）對β淀粉樣蛋白（Aβ2535）誘導SHSY5Y細胞凋亡的保護作用。方法用Aβ2535誘導體外培養的SHSY5Y細胞凋亡，并用WEG進行保護。MTT法檢測細胞存活率，Hoechst33258染色觀察細胞形態的變化，流式細胞儀分析亞二倍體峰和DNA含量，檢測細胞凋亡。結果Aβ25-35 50 μmol/L誘導SHSY5Y細胞72 h后，鏡下觀察到細胞變圓，損傷并聚集，Hoechst33258染色可見明顯的顆粒狀和固縮狀熒光，流式細胞儀檢測到明顯的亞二倍體峰，凋亡率達(37.30±0.69)%。而Aβ25-35和不同濃度的WEG(1，5，10，15 mg/ml)同時處理后，細胞形態明顯改善，MTT值顯著高于Aβ25-35處理組（P

【關鍵詞】 SHSY5Y細胞； Aβ2535； 人參水提物； 細胞凋亡

Abstract：ObjectiveTo study the neuroprotective effects of water extract of Ginseng on SHSY5Y cell apoptosis induced by Amyloid β peptide .MethodsSH-SY5Y cells were treated with Aβ2535 to induce apoptosis in vitro， water extract of Ginseng was added into the culture to test its neuroprotective effects. The cell viability was measured by MTT test，the morphology of SHSY5Y cells was observed by Hoechst33258 staining and DNA content by FCM. ResultsTreated by Aβ25-35 50μmol/L 72h later， SHSY5Y cells turned rounder ， aggregated and were positively stained with fluorochrome Hoechst 33258.Cells displayed a typical subdiploid peak in flow cytometry ，and the percentage of apoptosis was (37.30±0.69)%（P

Key words：SH-SY5Y cells； Amyloid β peptide； WEG； Apoptosis

阿爾茨海默癥(Alzheimer's Disease，AD)，俗稱老年癡呆癥，為常見的中樞神經系統退行性疾病，是一種在正常意識狀態下喪失智能能力的疾病。隨著全球人口老齡化的程度加快，AD等神經退行性疾病在老年人中的發病率居高不下，給社會和家庭帶來了沉重的負擔。由于AD發病機制復雜，目前臨床用于治療AD的藥物均只對發病過程中的某一或某幾個環節起效，但副作用大。中藥由于在防治AD等老年性疾病方面有豐富的實踐經驗及毒性相對小等潛在優勢，越來越受到醫學界的重視和推崇。本課題選擇包含Rg1，Rb1等眾多具有益智作用成分的人參，以中醫藥理論為指導，按照中藥的傳統煎煮法，制成水提物凍干粉，以Aβ25-35誘導SH-SY5Y細胞凋亡作為神經元損傷的體外模型，觀察人參水提物對神經元的保護作用。

1 材料與方法

1.1 試劑Aβ25-35 (Sigma公司)；1640培養基(Gibico公司)；FBS(Hyclone公司)；Trypsin(Gibico公司)；MTT(Sigma公司)；DMSO(Sigma公司)；Hoechst33258(Fluka)；PI(Sigma公司)；RNase(sigma公司)；人參(深圳華輝藥業有限公司，產地吉林，經湖南中醫藥大學藥學院劉塔斯教授鑒定為人參)。

1.2 儀器CO2培養箱，美國Shellab；倒置熒光相差顯微鏡，德國Leica公司(型號：DC300)；超凈工作臺，ESCO公司；離心機，德國Hettich公司(型號：Rotofix32)；低溫離心機，美國Coulter公司(型號：AllegraTM 21R)；流式細胞儀，美國Coulter公司(型號：Epics XL)；酶標儀，德國BMG公司(型號：Polar star Galaxy)。

1.3 藥物制備

1.3.1 人參水提物取100 g人參粉碎，加8倍蒸餾水浸泡30 min，水浴2 h，紗布過濾，濾渣先后加6倍，4倍量水，各提30 min。3次濾液合并，冷凍干燥，得到40 g凍干粉，得率40%。凍干粉溶于滅菌去離子水，12 000 g，離心5 min，上清液過0.22 μm的濾膜，培養基稀釋成實驗所需濃度(以生藥濃度計)。

1.3.2 Aβ25-351 mg Aβ25-35溶于943 μl滅菌去離子水，配制1 mmol/L的母液，-20℃保存，用前37℃老化7 d，培養基稀釋成實驗所需濃度。

1.4 細胞培養及預處理SH-SY5Y細胞取自本實驗室細胞庫。用含有體積分數為10%的FBS，1%的NEAA（非必需氨基酸）的1640完全培養基，于37℃，5%的CO2孵箱中培養。4 d進行1次傳代，傳代按1∶3進行。取生長期細胞進行實驗。

1.5 實驗分組將細胞分3組。正常對照組：常規加入完全培養基；Aβ25-35模型組：加入Aβ25-35；WEG保護組：同時加入Aβ25-35和不同濃度的WEG。

1.6 觀察指標和方法

1.6.1 倒置顯微鏡觀察細胞形態SH-SY5Y 以7×104 cells/ml密度接種于6孔板，模型組用終濃度為0，5，10，25，50 μmol/L 的Aβ25-35分別作用24，48，72 h，WEG保護組用0，1，5，10，15 mg/ml WEG 與Aβ25-35共同孵育（Aβ25-35作用濃度和時間點根據上述結果而設），每組均3個復孔，于倒置顯微鏡下觀察并拍照。

1.6.2 MTT測定細胞存活率取對數生長期細胞，調整細胞密度為1×104 cells/ml，以100 μl/well接入96孔板，37℃，5%的CO2孵箱中培養36 h。36 h后吸棄舊培養基，正常對照組加入100 μl的新鮮培養基，Aβ25-35損傷組加入100 μl含有Aβ25-35的培養基，WEG保護組加入100 μl含有Aβ25-35和不同濃度的WEG的培養基，各濃度6個復孔。藥物作用68 h后，每孔加5 mg/ml的MTT(PBS配)10 μl，4 h后，棄培養液，加DMSO150 μl/孔，輕輕振蕩10 min，使甲臢顆粒溶解，用酶標儀在570 nm處讀取吸光度(OD)值，取6孔均值按下列公式計算，細胞存活率（%）=實驗組OD值/對照組OD值×100%。

1.6.3 Hoechst 33258染色形態學觀察將SH-SY5Y細胞（7×104/ml）接種于6孔板內的蓋玻片上，各實驗組按要求給予不同的處理因素后，加入新鮮配制的4％多聚甲醛（pH為7.4）于37 ℃固定細胞30 min，PBS液洗兩次，加5 mg/L Hochest 33258 染色液染色30 min，PBS液洗后，用封片液（20 mmol/L檸檬酸，50 mmol/L磷酸氫二鈉，50％甘油，pH 5.5）封片后熒光顯微鏡觀察、攝片。

1.6.4 PI單染流式細胞儀測定細胞凋亡率和細胞周期調整細胞密度為7×104 cells/ml，以1.5 ml/well種入6孔板。分組和處理同上。每組6個復孔。藥物作用72 h后，細胞刮刮取細胞，1 000 r/min離心10 min，去上清，PBS漂洗兩次，沉淀中緩慢依次加入70％的冰乙醇固定。-20℃固定24 h。固定后，1 000 r/min離心10 min，去上清，PBS漂洗兩次，調整細胞濃度為1×106/ml。加RNase至終濃度100 μg/ml，37 ℃水浴30 min。加PI 至終濃度50 μg/ml，350目尼龍網濾膜過濾去除細胞團塊，4 ℃避光染色30 min后，上流式細胞儀檢測（激發波長：488 nm；發射波長：610 nm）各期細胞DNA的含量。每組3個復孔。測定數據按流式細胞儀所配置的軟件進行數據處理，以DNA組方圖出現低于G1期DNA含量的亞G1峰的大小代表凋亡細胞的多少。

1.6.5 統計學處理全部數據采用SPSS10.0統計軟件進行統計分析，數據用±s表示，組間比較用單因素方差分析(One-way ANOVA)檢驗。

2 結果

2.1 Aβ誘導SH-SY5Y凋亡濃度和時間的確定鏡下觀察發現對照組細胞形態正常，有明顯的軸突（圖1a所示），而模型組細胞隨時間推移和Aβ25-35濃度升高，細胞損傷逐漸增強，胞漿黯淡，出現空泡和小斑點，軸突消失，細胞皺縮并聚集成簇，各濃度在72 h損傷嚴重，出現細胞腫脹，胞膜破裂，胞內容物釋放，包間沉積物聚集（圖1b所示）。流式檢測發現，50μmol/L Aβ25-35作用SH-SY5Y 細胞72 h后，凋亡率達(37.30±0.69)%，較對照組有明顯的統計學差異，Hoechst 33258染色也發現有藍色的顆粒狀和固縮狀熒光等典型的凋亡特征（圖1e所示）。Aβ25-35誘導SH-SY5Y細胞凋亡的最佳濃度和時間為50 μmol/L和72 h。

2.2 WEG對Aβ誘導的SH-SY5Y細胞凋亡的影響鏡下觀察發現Aβ25-35和不同濃度的WEG(1，5，10，15 mg/ml)同時孵育SH-SY5Y 細胞72 h后，細胞形態都得到明顯改善，胞漿均勻，大部分細胞出現軸突，細胞斑點和沉積物少。5，10，15 mg/ml WEG組較1 mg/mlWEG組抗凋亡作用更為明顯（圖1c所示）。

2.3 結果各組細胞MTT值如表1所示，與正常對照組相比，Aβ25-35處理組A值顯著降低(P

表1 WEG對Aβ25-35引起的SH-SY5Y細胞毒性的細胞存活率的影響（略）

與正常對照組比較，##P

2.4 Hoechst 33258的染色分析結果如圖1 所示，正常對照組細胞核出現彌漫均勻的低強度熒光（圖1d），而Aβ25-35模型組細胞核呈濃染致密的固縮形態和顆粒狀熒光（圖1e），WEG和Aβ25-35同時給入細胞后，固縮形態和顆粒狀熒光顯著減少（圖1f）。

圖1 WEG對Aβ25-35引起的細胞形態和凋亡的保護作用（略）

2.5 流式細胞儀DNA倍體分析結果如圖2和 圖3所示，50 μmol/L Aβ25-35作用SH-SY5Y細胞72 h后，凋亡率為(37.30±0.69)%，與對照組（1.56±0.80）%比較，差異具有顯著性意義（P

表2 Aβ25-35和/或WEG作用SH-SY5Y細胞后細胞周期分析（略）

與正常對照組比較，*P

圖2 Aβ25-35和不同濃度WEG作用SH-SY5Y細胞后流式分析（略）

圖3 WEG對Aβ25-35誘導SH-SY5Y細胞凋亡的保護作用（略）

3 討論

AD多發于老年人，臨床表現為進行性記憶力減退，認知功能障礙等，其病因和發病機制錯綜復雜，眾多研究者從不同角度提出各種發病假說，如基因突變假說、氧化應激及興奮性毒性假說等，近年來，淀粉樣蛋白假說及其相關的凋亡假說受到越來越多研究者的關注，該學說認為Aβ的聚集在AD發生發展過程中起核心作用，Aβ激發神經元細胞的凋亡進程，導致神經細胞功能紊亂和死亡，最終引起癡呆，細胞過度凋亡可能是神經元退行性病變的原因［1，2］。Aβ是β淀粉樣蛋白前體(APP)的一個39～43個氨基酸片段，有神經毒性，包括Aβ25-35，Aβ1-42，Aβ1-40。其中Aβ25-35代表了最具毒性Aβ的生物活性片段［3］。本實驗采用Aβ25-35作為神經細胞凋亡的誘導劑。

人參是我國的傳統中藥，有大補元氣、寧身益智、益氣生津、補虛扶正、延年益壽之功效，被譽為“益氣要藥”。現代研究證明，人參中的主要成分皂苷具有明顯的促智作用［4～6］。

但大多數研究均是以皂苷單體（如Rg1，Rb2等）作為研究對象［7，8］，本實驗遵循中醫藥理論的整體治療觀，秉承中藥的臨床指導原則，采用傳統煎煮方法，用人參水提物凍干粉作為研究對象，以Aβ25-35誘導SH-SY5Y細胞凋亡做為AD模型，證明高濃度聚焦狀的Aβ25-35可誘導SH-SY5Y凋亡。而不同濃度的人參水提物可顯著降低Aβ25-35引起的高凋亡，對神經細胞有明顯的保護作用。在實驗過程中，以往大多數研究先將藥物預孵育，而后加入造模劑Aβ25-35，體現的是預防作用［9，10］。我們將Aβ25-35和人參水提物同時給入細胞，體現更多的是人參水提物對AD的治療作用。本課題研究為AD的臨床防治提供了一定依據，今后可從凋亡相關基因蛋白等方面深入研究人參水提物對Aβ25-35誘導SH-SY5Y凋亡的保護作用機制，進一步進行新型防治AD中藥的篩選。

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