動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)精選(九篇)

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第1篇：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)范文

關(guān)鍵詞：動(dòng)物細(xì)胞；單克隆抗體；問(wèn)題；設(shè)計(jì)

合理設(shè)計(jì)一系列與動(dòng)物細(xì)胞工程內(nèi)容相關(guān)的小問(wèn)題，將其有序連接成“問(wèn)題串”，并且在課堂教學(xué)過(guò)程中得到有效的利用，是促成課堂有效教學(xué)的一個(gè)有利手段。例如，在學(xué)習(xí)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)之前，可以設(shè)計(jì)問(wèn)題導(dǎo)入，也可以用這些問(wèn)題總結(jié)收尾，加以鞏固，此部分知識(shí)，我是這樣進(jìn)行問(wèn)題設(shè)計(jì)的。

一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)問(wèn)題設(shè)計(jì)

問(wèn)題1：為何動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程將組織分散成單個(gè)細(xì)胞呢？問(wèn)題2：如何將動(dòng)物組織分散成單個(gè)的細(xì)胞呢？問(wèn)題3：胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可說(shuō)明細(xì)胞間的物質(zhì)是什么成分？問(wèn)題4：既然胰蛋白酶能將細(xì)胞消化掉，那將動(dòng)物組織分散成單個(gè)細(xì)胞要注意什么問(wèn)題呢？問(wèn)題5：能夠用胃蛋白酶代替胰蛋白酶嗎？為什么？問(wèn)題6：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)取材時(shí)，一般是取胚胎組織或幼齡動(dòng)物的組織或器官，請(qǐng)解釋原因？參考答案：1.成塊的組織細(xì)胞靠在一起，彼此限制了細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖。2.先用剪刀剪碎，后用胰蛋白酶處理。3.胰蛋白酶水解蛋白質(zhì)；細(xì)胞間的成分是蛋白質(zhì)。4.注意時(shí)間的控制。5.不能，因?yàn)閮擅缸钸mpH不同，而正常組織細(xì)胞的生存環(huán)境與胰蛋白酶的最適pH較接近。6.胚胎組織或幼齡動(dòng)物的組織或器官分裂、增殖旺盛。

第2篇：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)范文

【關(guān)鍵詞】細(xì)胞培養(yǎng) 生物制藥 應(yīng)用

隨著生命科學(xué)理論和技術(shù)的飛速發(fā)展，細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的地位和作用日益成熟，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的研究取得了可觀的效果，并且有著無(wú)限的應(yīng)用發(fā)展前景。主要的發(fā)展目標(biāo)包括：開(kāi)發(fā)生長(zhǎng)密度高、目標(biāo)產(chǎn)品分泌量大的細(xì)胞系；研制性能優(yōu)良、吸附與解離容易、重復(fù)利用的微載體；開(kāi)展規(guī)模化的生物反應(yīng)器、檢測(cè)系統(tǒng)、細(xì)胞培養(yǎng)與產(chǎn)物分離耦合系統(tǒng)等；設(shè)計(jì)新型培養(yǎng)基促進(jìn)生物制品安全；研究三維細(xì)胞的培養(yǎng)條件[1]。

生物制藥即運(yùn)用生物化學(xué)、醫(yī)學(xué)、微生物學(xué)等原理和方法，利用生物機(jī)體、組織、細(xì)胞、體液等生產(chǎn)具有預(yù)防、診斷和治療功能的藥物制品。有關(guān)研究者采用基因重組技術(shù)或其他創(chuàng)新生物技術(shù)生產(chǎn)治療性藥物，主要產(chǎn)品有基因工程藥物、抗體工程藥物、疫苗等幾類(lèi)。這些產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)研制及生產(chǎn)過(guò)程都離不開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。

1 疫苗生產(chǎn)

疫苗免疫是最有效的預(yù)防感染性疾病的措施之一。疫苗免疫是指利用病毒性制劑、細(xì)菌性制劑及類(lèi)毒素等人工主動(dòng)免疫制劑，通過(guò)作用于機(jī)體的免疫防御系統(tǒng)起到免疫應(yīng)答作用。傳統(tǒng)的流感疫苗生產(chǎn)多采用雞胚培養(yǎng)，但當(dāng)面臨高致病性流感全球大流行、微生物感染、內(nèi)毒素殘余量多等問(wèn)題時(shí)，傳統(tǒng)的雞胚生產(chǎn)方法可能難以滿足疫苗市場(chǎng)的需求。隨著細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的完善及其優(yōu)點(diǎn)的體現(xiàn)積極推進(jìn)使用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)替代雞胚培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)流感疫苗，未來(lái)將會(huì)越來(lái)越多依靠細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)獲得理想的疫苗。與此同時(shí)也存在一些缺陷，尤其是哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的病毒疫苗特別適合于工業(yè)的發(fā)展，應(yīng)用微載體大規(guī)模培養(yǎng)細(xì)胞生產(chǎn)流感疫苗，使得流感病毒適應(yīng)傳代細(xì)胞（如VERO細(xì)胞），該細(xì)胞不僅培養(yǎng)條件要求不高而且遺傳性狀穩(wěn)定，對(duì)多種病毒的感染敏感[2]，如利用生物反應(yīng)器大規(guī)模進(jìn)行病毒繁殖，可實(shí)現(xiàn)流感疫苗的規(guī)模化生產(chǎn)。MDCK細(xì)胞系是被公認(rèn)為最適于生產(chǎn)甲、乙型流感病毒疫苗的細(xì)胞系，對(duì)流感病毒增殖快、感染效率高，且不易變異[3]。其中典型代表，如巴斯德公司利用1000L反應(yīng)器微載體培養(yǎng)Vero細(xì)胞生產(chǎn)人用狂犬病疫苗和脊髓灰質(zhì)炎疫苗。由此可見(jiàn)，利用細(xì)胞培養(yǎng)疫苗已成為目前疫苗研制的重要應(yīng)用方向。

2 單克隆抗體制備

單克隆抗體是由單一B淋巴細(xì)胞克隆產(chǎn)生的高度均一、僅針對(duì)某一特定抗原表位的抗體。研究Hb在帕金森病中的發(fā)病機(jī)制，李旭穎等[4]制備抗Hb單克隆抗體，由重組人Hb作為抗原免疫小鼠，并將其細(xì)胞融合及細(xì)胞培養(yǎng)制備成雜交瘤，經(jīng)過(guò)篩選獲得抗人Hb單克隆抗體雜交瘤株，體內(nèi)誘生法制備腹水經(jīng)過(guò)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)等方法進(jìn)而獲得特異性抗Hb單克隆抗體。張培等[5]制備乙型腦炎病毒的單克隆抗體通過(guò)動(dòng)物免疫、細(xì)胞融合、克隆和篩選等方法，應(yīng)用ELISA等免疫學(xué)方法進(jìn)行特異性和亞型的鑒定，為快速檢測(cè)方法的建立奠定了基礎(chǔ)。單克隆抗體藥物研發(fā)已經(jīng)被列入863計(jì)劃和國(guó)家重點(diǎn)項(xiàng)目，國(guó)內(nèi)已經(jīng)有2個(gè)治療性單抗產(chǎn)品準(zhǔn)備生產(chǎn)，3個(gè)治療性產(chǎn)品處于臨床試驗(yàn)階段，多個(gè)抗體藥物處于臨床研究階段，已經(jīng)批準(zhǔn)的治療性單抗有31個(gè)，目前國(guó)內(nèi)正在進(jìn)行臨床前研究的抗體藥物有：抗CEA嵌合抗體；抗破傷風(fēng)抗體及抗乙型腦炎等[6]。

3 藥物篩選

藥物篩選是從天然或合成的化合物中篩選出高效的新藥或先導(dǎo)化合物。生物活性和藥理作用檢測(cè)所篩選出的高效的新藥或先導(dǎo)化合物，并根據(jù)檢測(cè)結(jié)果評(píng)價(jià)某一物質(zhì)的藥用前景，是新藥研究的最初過(guò)程和關(guān)鍵步驟。體外二維和應(yīng)用球狀聚集體、細(xì)胞片層、脫細(xì)胞基質(zhì)進(jìn)行三維培養(yǎng)肝細(xì)胞的具體技術(shù)是進(jìn)行藥物毒性檢測(cè)的重要途徑[7]。Kostadinava等建立了一種長(zhǎng)時(shí)間的三維肝細(xì)胞共培養(yǎng)體系，比單層培養(yǎng)肝細(xì)胞能更好地檢測(cè)體內(nèi)藥物導(dǎo)致的毒性。細(xì)胞水平的藥物篩選更接近人體生理狀態(tài)，外界環(huán)境干擾少，準(zhǔn)確率高，是細(xì)胞水平藥物篩選模型的核心技術(shù)高內(nèi)涵篩選。高內(nèi)涵藥物篩選主要在微陣列多孔板上完成，通過(guò)在微孔板上進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，施加藥物刺激進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作和數(shù)據(jù)的采集和分析。HCS技術(shù)可完成各種對(duì)于細(xì)胞生理現(xiàn)象本質(zhì)的研究，Talyor等[8]提出高內(nèi)涵概念，HCS模型主要建立在細(xì)胞水平，通過(guò)觀察樣品對(duì)固定或動(dòng)態(tài)細(xì)胞的多個(gè)功能的作用，涉及各種不同的靶點(diǎn)，從多個(gè)角度分析樣品的作用，最終確定樣品的活性和可能的毒性。近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的微流控芯片技術(shù)有可能成為細(xì)胞水平藥物篩選的理想選擇。Ye等[9]構(gòu)建了一套用于細(xì)胞水平藥物篩選研究的集成化微流控芯片系統(tǒng)，它可以將細(xì)胞種植、培養(yǎng)、標(biāo)記、加藥、梯度稀釋等操作通過(guò)微通道網(wǎng)絡(luò)流體控制技術(shù)集成到一張芯片完成，保持了細(xì)胞結(jié)構(gòu)的完整性，可全面記錄細(xì)胞對(duì)藥物刺激的各種反應(yīng)。

第3篇：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)范文

【摘要現(xiàn)代生物制藥技術(shù)是一項(xiàng)與制藥產(chǎn)業(yè)結(jié)合極為密切的高新技術(shù),不斷為醫(yī)藥行業(yè)提供新產(chǎn)品、新劑型,為制藥界開(kāi)創(chuàng)一條嶄新之路,正在改變生物制藥業(yè)的面貌,為解決人類(lèi)醫(yī)藥難題提供最有希望的途徑。文章分析了幾項(xiàng)生物制藥技術(shù),并對(duì)生物制藥的展望進(jìn)行了分析。

【主題詞生物 制藥 技術(shù)

一 生物制藥技術(shù)簡(jiǎn)介

1 基因工程技術(shù)：激素和許多活性因子是調(diào)節(jié)人體生理代謝與機(jī)能的重要物質(zhì),其活性強(qiáng),臨床療效明顯,但這些物質(zhì)自然界甚為稀少,從人體及動(dòng)物中提取難度大,來(lái)源有限,無(wú)法滿足臨床需要,而現(xiàn)代生物制藥技術(shù)卻為臨床提供了這類(lèi)廉價(jià)、高效的藥品。胰島素是治療糖尿病的激素類(lèi)藥物,一般從動(dòng)物中提取,其資源缺乏,價(jià)格昂貴,利用基因工程手段將人或動(dòng)物胰島素合成基因分離后移植到微生物細(xì)胞中,并實(shí)現(xiàn)基因表達(dá),這樣用基因工程手段得到基因重組微生物被稱(chēng)為基因工程菌,利用基因工程菌在200L發(fā)酵灌中產(chǎn)生10克胰島素相當(dāng)于450千克胰臟中提取的產(chǎn)量。人生長(zhǎng)激素(簡(jiǎn)稱(chēng)HGH)是腦下垂體前葉分泌的由191種氨基酸組成蛋白質(zhì)類(lèi)激素,分子量為22000D。以前,人生長(zhǎng)激素只能從人腦垂體前葉中分離純化,應(yīng)用深受限制,而目前利用基因工程技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞工藝可得到,并且與人生長(zhǎng)激素相同,臨床用于治療垂體前葉HGH分泌障礙引起的侏儒癥,促進(jìn)燒傷及骨折等創(chuàng)傷性組織的恢復(fù),也用于改善老年性腎萎縮的癥狀及治療胃潰瘍。

2 酶及細(xì)胞固定化技術(shù)：微生物轉(zhuǎn)化及酶催化工藝早已在制藥工業(yè)中廣泛應(yīng)用。酶與固定化技術(shù)結(jié)合彌補(bǔ)酶的不足,在制藥界取得顯著發(fā)展,如用大腸桿菌酞化酶生產(chǎn)6一APA、犁頭霉素生產(chǎn)氫化可的松、乳酸菌轉(zhuǎn)化蔗糖制備右旋糖醉等。原西德BeohringerNannhein公司在青霉素酞化酶固定化方面取得了很大的進(jìn)展,他們用聚丙酞胺凝膠包埋法制成微型小球狀固定化酶已投人生產(chǎn),其表面活性為100一150U/g,1kg固定化酶可生產(chǎn)500kg6一APA,能連續(xù)反應(yīng)300次,他們用第二代工程菌的固定化酶轉(zhuǎn)化率達(dá)到85%一90%,反應(yīng)次數(shù)達(dá)900次,有人用固定化后活力可維持100天以上,固定化細(xì)胞、特別微生物細(xì)胞在抗生素、激素、氨基酸等藥物的合成中得到廣泛的研究和應(yīng)用。用固定化酶的膜反應(yīng)器分離布洛芬可得到許多有光學(xué)活性的化合物,體外試驗(yàn)證明其S一異構(gòu)體比R一異構(gòu)體活性高100倍。近年采用多種固定化系統(tǒng)組成的人工腎可在體內(nèi)反復(fù)返轉(zhuǎn)具有顯著臨床效果。

3 細(xì)胞工程及單克隆抗體：植物細(xì)胞工程培養(yǎng)技術(shù)為開(kāi)辟藥物新資源、使微生物原料生產(chǎn)工業(yè)化、保護(hù)自然界生態(tài)平衡具有重要意義。中醫(yī)臨床應(yīng)用之中,中草藥數(shù)千種,其中89%來(lái)源地植物,初始靠手集野生資源,最后鑒于野生資源有限,及不斷開(kāi)發(fā)利用,難以滿足需要,許多名貴藥材如天麻、人參、當(dāng)歸、黃茂等均采用植物細(xì)胞,大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù),其所含有效成份較天然植物含量高。如培養(yǎng)的人參細(xì)胞中Ginselagoside含量較天然植物高5.7倍。培養(yǎng)的煙草細(xì)胞C。QIO含量較天然植物高16.30倍等等。由此可知,植物細(xì)胞工程將為人類(lèi)創(chuàng)造一代新型中藥制劑造福人類(lèi)。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)主要以植物的微生物難以生產(chǎn)出蛋白質(zhì)類(lèi)藥品,并實(shí)現(xiàn)工業(yè)化、商品化。英國(guó)韋爾科母公司采用8立方米培養(yǎng)罐培養(yǎng)生產(chǎn)a一干擾素為工業(yè)化動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)典型實(shí)例,被稱(chēng)為"超大規(guī)模"動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)獲得成功。1975年英國(guó)科學(xué)家通過(guò)淋巴細(xì)胞與骨髓細(xì)胞融合產(chǎn)生的雜交瘤,經(jīng)體外培養(yǎng)、分離可得到一些無(wú)性繁殖細(xì)胞株,它們能分泌免疫學(xué)均一抗體。這種抗體為單克隆抗體,單克隆抗體一經(jīng)間世顯示巨大生命力,由于單克隆抗體目前在醫(yī)藥領(lǐng)域具有特異性強(qiáng)、操作方便等特點(diǎn),因此現(xiàn)在已有越來(lái)越多的單克隆抗體代替?zhèn)鹘y(tǒng)的抗血清用于臨床診斷。1981年美國(guó)批準(zhǔn)第一個(gè)單克隆抗體診斷試劑后,1983一1984年又批準(zhǔn)了37種,1985年美國(guó)FDA認(rèn)可就有55種,到1987年底,美國(guó)已批準(zhǔn)單克隆診斷試劑在上百種以上,它主要用于艾滋病、腫瘤性疾病、乙型肝炎及細(xì)菌性感染等疾病的診斷,臨床療效顯著。由于單克隆抗體對(duì)相應(yīng)抗原結(jié)合,具有高度專(zhuān)一性,因此有人試用腫瘤抗原的抗體作為抗腫瘤藥物的攜帶者,將藥物導(dǎo)人腫瘤細(xì)胞,從而使腫瘤藥物有選擇性殺傷腫瘤細(xì)胞而不傷害正常細(xì)胞,這種由單克隆抗體和抗癌藥物組成的導(dǎo)向藥物為"生物導(dǎo)彈"。

二 生物技術(shù)應(yīng)用展望

1 加大研發(fā)投入,建立高效研發(fā)產(chǎn)品線。國(guó)內(nèi)大多數(shù)生物醫(yī)藥中小企業(yè)缺乏完善的自主研發(fā)體系,新產(chǎn)品研發(fā)效率低下。這與國(guó)內(nèi)生物醫(yī)藥業(yè)研發(fā)投入嚴(yán)重不足有關(guān)。目前,國(guó)內(nèi)生物醫(yī)藥企業(yè)大多數(shù)研發(fā)投入占銷(xiāo)售收入不足10%,甚至低于2%,遠(yuǎn)低于國(guó)外同類(lèi)企業(yè)的研發(fā)投入。沒(méi)有足夠的研發(fā)投入往往造成后續(xù)產(chǎn)品開(kāi)發(fā)乏力。國(guó)內(nèi)生物醫(yī)藥企業(yè)需要加大研發(fā)投入,建立或完善從上游構(gòu)建、小試、中試放大、臨床研究到最終生產(chǎn)的高效通用技術(shù)平臺(tái),為企業(yè)發(fā)展提供源源不斷的新產(chǎn)品。國(guó)內(nèi)少數(shù)企業(yè),如沈陽(yáng)三生,每年的研發(fā)投入占銷(xiāo)售收入的10%,該公司陸續(xù)開(kāi)發(fā)出了干擾素、IL-2、EPO、重組人血小板生成素等一系列產(chǎn)品,經(jīng)營(yíng)業(yè)績(jī)良好。

2 哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)藥物開(kāi)發(fā)是國(guó)內(nèi)生物醫(yī)藥的重大發(fā)展機(jī)會(huì)。全球銷(xiāo)售領(lǐng)先品種大部分都采用哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的技術(shù)平臺(tái),目前,特別是單克隆抗體藥物已經(jīng)成為了生物醫(yī)藥的重要發(fā)展方向。在國(guó)內(nèi),大多數(shù)銷(xiāo)售領(lǐng)先的主要品種不能實(shí)現(xiàn)國(guó)產(chǎn)化,往往不是由于專(zhuān)利限制,而是國(guó)內(nèi)基本未能掌握該技術(shù)平臺(tái)。預(yù)期在未來(lái)數(shù)年內(nèi),能真正解決哺乳動(dòng)物細(xì)胞高效表達(dá)及大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)這一重大技術(shù)平臺(tái)的國(guó)內(nèi)企業(yè),將會(huì)獲得豐厚的利潤(rùn)回報(bào)。

3 選擇合適的產(chǎn)業(yè)化項(xiàng)目。醫(yī)藥產(chǎn)品開(kāi)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)大,即使產(chǎn)品開(kāi)發(fā)成功,一般每10個(gè)新藥中大約只有3個(gè)能獲得超過(guò)其開(kāi)發(fā)費(fèi)用的收入,而另外7個(gè)新藥的收入還不足以補(bǔ)償其研發(fā)費(fèi)用。與其它化學(xué)藥一樣,大多數(shù)生物醫(yī)藥產(chǎn)品盈利能力低下,甚至虧損。因此,在生物醫(yī)藥研發(fā)立項(xiàng)前,必須對(duì)其進(jìn)行科學(xué)、市場(chǎng)等方面的全面論證,以減少項(xiàng)目研發(fā)及市場(chǎng)銷(xiāo)售失敗風(fēng)險(xiǎn)。

生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)是發(fā)展前景巨大的一個(gè)產(chǎn)業(yè),隨著"人類(lèi)基因組"等生物醫(yī)學(xué)的發(fā)展,越來(lái)越多的生物基因藥物將被研發(fā)和投入生產(chǎn),生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)將蓬勃發(fā)展。

參考文獻(xiàn)

［1］文淑美.全球生物制藥產(chǎn)業(yè)發(fā)展態(tài)勢(shì)［J］.中國(guó)生物工程雜志,2006,26(1):92-96

第4篇：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)范文

［關(guān)鍵詞］地方院校；動(dòng)物細(xì)胞工程；困境；對(duì)策

［中圖分類(lèi)號(hào)］G6420［文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼］A［文章編號(hào)］1005-6432（2014）21-0159-02

在生物技術(shù)專(zhuān)業(yè)的培養(yǎng)方案中,《動(dòng)物細(xì)胞工程》是一門(mén)重要的專(zhuān)業(yè)方向的限選課程,也是專(zhuān)業(yè)應(yīng)用方面的骨干課程。它與《植物細(xì)胞工程》或者《植物組織培養(yǎng)》課程是并列開(kāi)設(shè)的。本課程要掌握的核心技術(shù)就是細(xì)胞的培養(yǎng)和繁殖。細(xì)胞工程的理論基礎(chǔ)和技術(shù)基礎(chǔ)等理論知識(shí)是為掌握這一技術(shù)做準(zhǔn)備的。由于《動(dòng)物細(xì)胞工程》是現(xiàn)代生物技術(shù)領(lǐng)域中代表著最新發(fā)展前沿的一門(mén)實(shí)驗(yàn)技術(shù)課程［1］,其教學(xué)內(nèi)容前沿和實(shí)驗(yàn)條件高端,因此對(duì)于一些地方院校來(lái)說(shuō),開(kāi)設(shè)這門(mén)課程要達(dá)到預(yù)期和理想的效果,有一定的難度和困難,需要在困境中尋找出路,解決課程教學(xué)中存在的這些難題,提高《動(dòng)物細(xì)胞工程》的教學(xué)質(zhì)量。

1《動(dòng)物細(xì)胞工程》教學(xué)課程中遇到的困境

11師資條件

教師是教學(xué)的主導(dǎo)者,因此教師素質(zhì)決定了課程教學(xué)的實(shí)施情況和教學(xué)效果的評(píng)價(jià)。在地方院校,從事《動(dòng)物細(xì)胞工程》課程教學(xué)的教師一般來(lái)自院校畢業(yè)的研究生和博士生,他們主要從事理論基礎(chǔ)研究,缺乏技術(shù)的實(shí)踐應(yīng)用能力和經(jīng)驗(yàn)。然而,《動(dòng)物細(xì)胞工程》是一門(mén)應(yīng)用性學(xué)科,技術(shù)性很強(qiáng)的課程［2］,因此,在師資水平這一環(huán)節(jié)上,與課程的理想教學(xué)效果和目標(biāo)存在顯著的差距,不容忽視。

12實(shí)驗(yàn)條件

許多地方院校由于資金和條件的限制,開(kāi)設(shè)《動(dòng)物細(xì)胞工程》實(shí)驗(yàn)應(yīng)具備的基本條件不足,只能開(kāi)設(shè)一些簡(jiǎn)單的實(shí)驗(yàn)或者根本就不做實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)中關(guān)鍵的技術(shù)是無(wú)菌技術(shù)。能夠建立一個(gè)高標(biāo)準(zhǔn)的細(xì)胞培養(yǎng)房是最好的,除了封閉的細(xì)胞房,還需要無(wú)菌操作臺(tái),倒置顯微鏡,CO2培養(yǎng)箱,冰箱,CO2罐。液氮罐等大型儀器,這需要大筆資金投入。可能對(duì)于地方院校,這門(mén)課程實(shí)驗(yàn)的順利開(kāi)設(shè),更大的難度不是來(lái)自硬件而是來(lái)自軟件。CO2和液氮的罐裝不能夠在本城市或者本地區(qū)完成,還要到省城才能弄到,難度系數(shù)比較大,這就費(fèi)時(shí)費(fèi)力費(fèi)錢(qián)了。由于罐裝液氮的不便,細(xì)胞就不能長(zhǎng)期保存,每次實(shí)驗(yàn)之前還需要購(gòu)買(mǎi)細(xì)胞株。由于條件的限制,實(shí)驗(yàn)內(nèi)容就相對(duì)簡(jiǎn)單了,學(xué)生們的技能就不能得到充分地形成和發(fā)展。

13教學(xué)內(nèi)容和方法

《動(dòng)物細(xì)胞工程》這門(mén)課程一般在大學(xué)三年級(jí)開(kāi)設(shè),學(xué)生對(duì)理論知識(shí)的學(xué)習(xí)興趣不高。此外,由于當(dāng)今世界科學(xué)技術(shù)突飛猛進(jìn),知識(shí)信息量增長(zhǎng)迅速,細(xì)胞工程的研究?jī)?nèi)容也日新月異,新技術(shù)新方法不斷涌現(xiàn),目前細(xì)胞工程相關(guān)的教材眾多,但生物技術(shù)發(fā)展日新月異,教材的更新速度根本無(wú)法趕上［2］,課本上的一些知識(shí)就顯得陳舊了。基礎(chǔ)的實(shí)驗(yàn)內(nèi)容對(duì)于所有的學(xué)生來(lái)說(shuō),都是一模一樣的,學(xué)生們就感覺(jué)機(jī)械,缺乏動(dòng)力和激情去做實(shí)驗(yàn)。而且學(xué)生實(shí)驗(yàn)時(shí),一般實(shí)驗(yàn)老師都做好了實(shí)驗(yàn)的制備,學(xué)生只是做整體實(shí)驗(yàn)的一部分,如果要他們單獨(dú)去做或者獨(dú)立完成相關(guān)的畢業(yè)論文實(shí)驗(yàn),就會(huì)遇到困難。就如沒(méi)有斷奶的孩子,缺乏老師的幫助是完成不了的。

另外,現(xiàn)在的大學(xué)生在中學(xué)階段就經(jīng)歷過(guò)課程改革,進(jìn)行“導(dǎo)學(xué)制”的學(xué)習(xí)模式。但是在大學(xué)里,還是傳統(tǒng)的教學(xué)模式居多。滿堂灌的傳統(tǒng)教學(xué)模式,使學(xué)生感到枯燥乏味,沒(méi)有全身心地投入到這門(mén)學(xué)科的學(xué)習(xí),感覺(jué)自己是一旁觀者,進(jìn)而對(duì)這門(mén)學(xué)科產(chǎn)生厭學(xué)情緒。

2對(duì)策研究

21加強(qiáng)師資隊(duì)伍建設(shè)

為提高教師的教學(xué)水平,特別是技術(shù)應(yīng)用方面的水平,可以選送或者派送教師去參加相關(guān)的培訓(xùn)和研修。對(duì)于地方院校,有省教育廳和國(guó)家教育部資助的國(guó)外訪學(xué)和國(guó)內(nèi)訪學(xué)項(xiàng)目,教師可以通過(guò)申請(qǐng)獲得有力的資助,到相關(guān)的高等院校的實(shí)驗(yàn)室、科研機(jī)構(gòu)、公司、工廠等進(jìn)行研修工作,開(kāi)闊視野,提高技術(shù)的實(shí)踐應(yīng)用能力和經(jīng)驗(yàn)。對(duì)于地方院校,人事處每年都有派送教師進(jìn)修學(xué)習(xí)的計(jì)劃和預(yù)算,可以通過(guò)申請(qǐng)獲得資助,外出學(xué)習(xí),開(kāi)闊眼界,積累經(jīng)驗(yàn)。另外,加強(qiáng)師資隊(duì)伍建設(shè),還可以通過(guò)組建合理的教學(xué)團(tuán)隊(duì),各取其長(zhǎng),實(shí)施階梯式教學(xué),提高教學(xué)水平［3］［4］。

22創(chuàng)造實(shí)驗(yàn)條件

地方院校要具備開(kāi)設(shè)《動(dòng)物細(xì)胞工程》實(shí)驗(yàn)的基本條件,首先要解決資金問(wèn)題,可以每年申請(qǐng)學(xué)校教務(wù)處關(guān)于實(shí)驗(yàn)室建設(shè)這部分的經(jīng)費(fèi)計(jì)劃和預(yù)算,先購(gòu)置最基本的儀器和設(shè)備,每年的積累和累加,慢慢地就具備了細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)室的規(guī)模。還可以申報(bào)產(chǎn)學(xué)研合作項(xiàng)目,省部建實(shí)驗(yàn)室、科研等項(xiàng)目,利用這些項(xiàng)目的資金來(lái)創(chuàng)造實(shí)驗(yàn)條件。總之,只要下定決心去做這件事情,個(gè)人、系部、學(xué)校聯(lián)手,廣開(kāi)渠道,資金問(wèn)題一定會(huì)解決。能夠建立一個(gè)高標(biāo)準(zhǔn)的細(xì)胞培養(yǎng)房是最好,如果確實(shí)條件有限,也可用較封閉的小房間做細(xì)胞房,房間裝上紫外燈和衛(wèi)生干凈也可以使用的。硬件問(wèn)題解決了再來(lái)解決軟件問(wèn)題,如果CO2的罐裝不能夠在本城市或者本地區(qū)完成,那么實(shí)驗(yàn)就集中在一段時(shí)間內(nèi)完成,因?yàn)橐还轈O2可用一個(gè)學(xué)期。如果液氮的罐裝不便,細(xì)胞可以短期保存到-80℃冰箱,或者每次實(shí)驗(yàn)之前可以到熟悉的實(shí)驗(yàn)室拿取細(xì)胞,快遞或者就用熱水瓶裝液氮帶回都可以。還可以就地取材做原代培養(yǎng)。

23改革教學(xué)內(nèi)容和方法

教學(xué)內(nèi)容安排決定了學(xué)生的基本知識(shí)結(jié)構(gòu)和基本能力的形成,教學(xué)內(nèi)容是否新穎,對(duì)提高教學(xué)質(zhì)量具有決定性的影響［3］。為了加強(qiáng)教材建設(shè),選擇內(nèi)容新穎、最新出版的教材,也可以自編講義不斷更新教學(xué)內(nèi)容。教師可以通過(guò)期刊、新聞電視和網(wǎng)絡(luò)媒體等及時(shí)查閱相關(guān)文獻(xiàn)或信息,掌握這一領(lǐng)域的動(dòng)態(tài)和前沿,傳授學(xué)生最新的知識(shí)。例如,在講解染色體工程時(shí),可以以湖南師范大學(xué)的“魚(yú)院士”劉筠院士為案例教學(xué),向?qū)W生傳授“新物種異緣四倍體魚(yú)”培育原理和院士的科研故事。還可以利用見(jiàn)習(xí)的機(jī)會(huì)去各實(shí)驗(yàn)基地參觀和學(xué)習(xí)。利用案例教學(xué)［5］,特別是真正意義上的案例,讓學(xué)生直觀體驗(yàn),不僅僅激發(fā)了學(xué)生們的學(xué)習(xí)興趣,對(duì)學(xué)生的思維訓(xùn)練和能力培養(yǎng)有益,而且激發(fā)了學(xué)生們的科研興趣。畢竟生物專(zhuān)業(yè)學(xué)生的考研率名列前茅,需要激發(fā)他們的科研動(dòng)力。

讓中學(xué)的“導(dǎo)學(xué)制”學(xué)習(xí)模式在大學(xué)延續(xù),靈活運(yùn)用各種教學(xué)方法,例如分批分組實(shí)驗(yàn),分組指導(dǎo)［6］；基于問(wèn)題學(xué)習(xí)的“PBL”教學(xué)法［7］等,只是告訴他們?cè)趺慈プ?但是具體做實(shí)驗(yàn)就由他們自己去完成。老師只是起一個(gè)導(dǎo)師的作用,所有的實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié),包括五蒸水的制備和試劑儀器的滅菌等,從頭至尾都由學(xué)生自己操作。老師慢慢地放手,大膽地讓學(xué)生們獨(dú)立操作,培養(yǎng)了學(xué)生的獨(dú)立實(shí)驗(yàn)?zāi)芰?這種能力的培養(yǎng)對(duì)學(xué)生項(xiàng)目的申報(bào)和完成有很大的幫助。首先,正是有了這種能力,學(xué)生們敢于申報(bào)項(xiàng)目,例如挑戰(zhàn)杯項(xiàng)目、省大學(xué)生研究性學(xué)習(xí)和創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)計(jì)劃項(xiàng)目等；正是有了這種能力,學(xué)生們能獨(dú)立完成項(xiàng)目和畢業(yè)論文；正是有了這種能力,可以讓學(xué)生承擔(dān)老師一部分研究工作,同時(shí)也培養(yǎng)了學(xué)生的科研能力和創(chuàng)新能力。

3結(jié)語(yǔ)

綜上所述是筆者在地方院校的《動(dòng)物細(xì)胞工程》課程的多年教學(xué)中,遇到的實(shí)際難題和困難,為走出困境,多方尋找出路,只為“提高《動(dòng)物細(xì)胞工程》的教學(xué)質(zhì)量”這一目標(biāo)而努力。通過(guò)加強(qiáng)師資隊(duì)伍建設(shè)、創(chuàng)造實(shí)驗(yàn)條件、改革教學(xué)內(nèi)容和方法來(lái)解決課程教學(xué)中存在的這些難題,效果明顯,學(xué)生們普遍對(duì)本課程產(chǎn)生了興趣,每年有較多學(xué)生申報(bào)的項(xiàng)目和畢業(yè)論文與本課程相關(guān)。每屆都有學(xué)生選修完這門(mén)課程后,加入到老師的科研團(tuán)隊(duì),承擔(dān)老師一部分科研項(xiàng)目和產(chǎn)學(xué)研項(xiàng)目的研究工作。每年都有學(xué)生考上這一方向的研究生。使學(xué)生在學(xué)習(xí)過(guò)程中真正有所收獲,也是老師的收獲。

參考文獻(xiàn)：

［1］葉希韻,孫劍華細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)課程拓展型教學(xué)體系的建立［J］實(shí)驗(yàn)室研究與探索,2007,27(11):96-98．

［2］李燾,屈新運(yùn)細(xì)胞工程教學(xué)的實(shí)踐與探索［J］生物學(xué)雜志,2008,25(4):68-70．

［3］楊慈清,石曉衛(wèi)細(xì)胞工程教學(xué)的實(shí)踐與經(jīng)驗(yàn)［J］教育教學(xué)論壇,2012,7(3):230-232．

［4］劉鍇棟細(xì)胞工程教學(xué)改革與探索［J］現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技,2010(10):30-32．

［5］李國(guó)慶,秦志峰,易嵐,賀慶芝案例教學(xué)法在細(xì)胞工程教學(xué)中的應(yīng)用研究［J］當(dāng)代教育理論與實(shí)踐,2011,3(2):71-73．

［6］王敏,湯蓉,付思思,劉學(xué)芹“水產(chǎn)動(dòng)物細(xì)胞工程基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)”教學(xué)模式的探討［J］高校生物學(xué)教學(xué)研究,2013,3(4):54-57．

第5篇：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)范文

[關(guān)鍵詞]細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn) 教學(xué)方法 教學(xué)內(nèi)容 教學(xué)改革

[中圖分類(lèi)號(hào)] G642.423 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 2095-3437（2015）12-0153-02

細(xì)胞生物學(xué)是生物學(xué)至關(guān)重要的一門(mén)基礎(chǔ)學(xué)科，發(fā)展也是日新月異，同時(shí)也是一門(mén)實(shí)驗(yàn)性學(xué)科。理論教學(xué)可使學(xué)生掌握課程的基礎(chǔ)知識(shí)、學(xué)科框架以及學(xué)科前沿，而實(shí)驗(yàn)課程的開(kāi)設(shè)能使學(xué)生鞏固所學(xué)理論知識(shí)，掌握該學(xué)科基本實(shí)驗(yàn)技能和研究方法，培養(yǎng)學(xué)生科學(xué)研究的思維和意識(shí)，提高學(xué)生的綜合科研素質(zhì)。細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)不僅是理論課程的補(bǔ)充，也是整個(gè)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)體系重要的一門(mén)課程。[1] [2]

隨著細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)方法的快速發(fā)展、教學(xué)條件的改善以及學(xué)生培養(yǎng)目標(biāo)的調(diào)整，目前細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)過(guò)程中逐漸出現(xiàn)了一些不足與缺陷。例如，課程內(nèi)容較陳舊，不能與時(shí)俱進(jìn);教學(xué)方法單一，課堂氣氛沉悶;學(xué)生缺乏積極主動(dòng)性，教學(xué)效果欠佳等。如何豐富和更新細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容，提高教學(xué)效果，達(dá)到培養(yǎng)創(chuàng)新型人才的目的，已成為擺在教師面前亟待解決的問(wèn)題。

一、優(yōu)化實(shí)驗(yàn)教學(xué)內(nèi)容

細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容廣泛，基本實(shí)驗(yàn)包括細(xì)胞器結(jié)構(gòu)觀察、細(xì)胞及亞細(xì)胞組分離心分離技術(shù)、細(xì)胞常規(guī)制片技術(shù)、細(xì)胞染色體標(biāo)本的制備及觀察等，有些較綜合性的實(shí)驗(yàn)涉及的實(shí)驗(yàn)技能較多，時(shí)間較長(zhǎng)，如動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)等。

基本實(shí)驗(yàn)所需時(shí)間較短，在課程設(shè)置時(shí)可將一些同類(lèi)的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目合并，合理安排時(shí)間，提高實(shí)驗(yàn)效率。細(xì)胞器的觀察可歸為一個(gè)實(shí)驗(yàn)，細(xì)胞核的分離與葉綠體的分離合并起來(lái)，有絲分裂和減數(shù)分裂染色體形態(tài)觀察和分析合并等。通過(guò)這些措施，可以在有限的時(shí)間里做更多的實(shí)驗(yàn)，提高了效率，節(jié)約了時(shí)間。這些基本實(shí)驗(yàn)教學(xué)的目的是強(qiáng)化細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)基本技能，掌握基本實(shí)驗(yàn)方法和技術(shù)。[2]

為了強(qiáng)化學(xué)生的基本操作能力，啟迪創(chuàng)新意識(shí)，培養(yǎng)綜合運(yùn)用實(shí)驗(yàn)技術(shù)分析和解決問(wèn)題的科研能力，應(yīng)合理開(kāi)設(shè)綜合性實(shí)驗(yàn)，將單一驗(yàn)證性的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目整合為系統(tǒng)化的綜合性實(shí)驗(yàn)。比如動(dòng)物細(xì)胞的原代培養(yǎng)及保存與復(fù)蘇這個(gè)實(shí)驗(yàn)，包含了原代培養(yǎng)、細(xì)胞計(jì)數(shù)及觀察、細(xì)胞的保存與復(fù)蘇等小的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目。

二、現(xiàn)代化手段輔助教學(xué)

多媒體教學(xué)直觀生動(dòng)，有利于學(xué)生對(duì)知識(shí)的理解和掌握，激發(fā)學(xué)生的興趣，提高教學(xué)效果。在實(shí)驗(yàn)課中，可播放一些自己錄制或購(gòu)買(mǎi)的實(shí)驗(yàn)教學(xué)錄像，讓學(xué)生更直觀、更清楚地看到整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程。例如在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)時(shí)，先播放動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的視頻錄像，讓學(xué)生了解前期準(zhǔn)備的細(xì)節(jié)，了解動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程和注意點(diǎn)，這樣可有效地提高學(xué)生的實(shí)驗(yàn)技能和實(shí)驗(yàn)的成功率，彌補(bǔ)傳統(tǒng)教學(xué)的不足。另外，隨著細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)的快速發(fā)展，一些重要而當(dāng)前不能實(shí)際操作的實(shí)驗(yàn)，在課堂上可以讓學(xué)生觀看教學(xué)錄像或網(wǎng)絡(luò)視頻資料，使學(xué)生了解其結(jié)構(gòu)和用途。如流式細(xì)胞儀的使用。

通過(guò)帶有顯微成像系統(tǒng)的顯微鏡，將好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果拍攝下來(lái)，可以對(duì)圖像進(jìn)行進(jìn)一步的分析和長(zhǎng)期保存，展示給學(xué)生，使學(xué)生有一個(gè)清晰、直觀的認(rèn)識(shí)，老師講課的時(shí)候也更加具有針對(duì)性，內(nèi)容更具體、生動(dòng)。例如在植物細(xì)胞有絲分裂和減數(shù)分裂染色體形態(tài)分析實(shí)驗(yàn)中，學(xué)生常對(duì)典型分裂時(shí)期的圖像把握不好，那么就可以拍攝該種生物各個(gè)分裂時(shí)期的圖像，有針對(duì)性的講解，學(xué)生更容易理解，也有了判斷依據(jù)和標(biāo)準(zhǔn)，提高了效率。

三、逐步實(shí)施開(kāi)放性實(shí)驗(yàn)教學(xué)，提高學(xué)生主動(dòng)性

目前細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)大多是驗(yàn)證性，學(xué)生對(duì)這種被動(dòng)的、按部就班的教學(xué)方法積極性不高，難以激發(fā)其學(xué)習(xí)興趣，效果也不理想。很多專(zhuān)家教授提出要打破細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)這種傳統(tǒng)教學(xué)模式，實(shí)施開(kāi)放性教學(xué)，培養(yǎng)學(xué)生科研思維能力。開(kāi)放性實(shí)驗(yàn)教學(xué)的效果毋庸置疑，但在我們的實(shí)踐中以及調(diào)研其他院校后發(fā)現(xiàn)，開(kāi)放性實(shí)驗(yàn)普遍存在教學(xué)時(shí)間有限、實(shí)驗(yàn)老師工作量巨大及需要較多實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)等現(xiàn)實(shí)問(wèn)題。另外，學(xué)生知識(shí)水平有限，難以把握實(shí)驗(yàn)難度，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)不夠合理，往往難以獲得理想的結(jié)果，有時(shí)會(huì)打擊學(xué)生的學(xué)習(xí)積極性。開(kāi)放性實(shí)驗(yàn)室的安全性和實(shí)驗(yàn)室日常管理等問(wèn)題也是不易解決的問(wèn)題。我們?cè)趯?shí)踐中采用多層次、靈活的辦法，適當(dāng)增加一些經(jīng)費(fèi)和人力投入開(kāi)放式教學(xué)，引導(dǎo)學(xué)生自己準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)，對(duì)實(shí)驗(yàn)所用材料進(jìn)行選擇，對(duì)同一實(shí)驗(yàn)采用不同實(shí)驗(yàn)方法等不同程度的、有限的開(kāi)放，達(dá)到學(xué)生積極參與的效果。

（一）實(shí)驗(yàn)材料自主選擇。實(shí)驗(yàn)課中經(jīng)常是一個(gè)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容都采用同一種實(shí)驗(yàn)材料，常出現(xiàn)個(gè)別同學(xué)實(shí)驗(yàn)積極性不高，參考別人實(shí)驗(yàn)結(jié)果的惰。有些實(shí)驗(yàn)內(nèi)容，老師可以很方便的準(zhǔn)備多種實(shí)驗(yàn)材料，學(xué)生可根據(jù)興趣選取不同材料。這樣學(xué)生會(huì)相互間進(jìn)行比較，思考由于材料不同引起的實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果有哪些不同，有利于提高學(xué)習(xí)興趣，培養(yǎng)科學(xué)思維能力，豐富基礎(chǔ)知識(shí)。例如，在植物細(xì)胞有絲分裂染色體形態(tài)分析試驗(yàn)中準(zhǔn)備洋蔥根尖和蠶豆根尖，學(xué)生選取其中一種材料進(jìn)行染色體形態(tài)觀察和分析，又如在石蠟切片制作過(guò)程中，可選用植物或動(dòng)物材料。[3]這樣學(xué)生就會(huì)比較兩種材料有什么不同，分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果的差異在哪里，為什么有這樣的結(jié)果。這樣帶著問(wèn)題做實(shí)驗(yàn)，在實(shí)驗(yàn)中尋找答案，就會(huì)調(diào)動(dòng)學(xué)習(xí)積極性，提高教學(xué)效果。

（二）靈活采用實(shí)驗(yàn)方法。在實(shí)驗(yàn)方法上同樣可實(shí)行開(kāi)放式教學(xué)，如細(xì)胞活性測(cè)定的實(shí)驗(yàn)中，染料排斥法、雙色熒光檢測(cè)法和N11檢測(cè)法都可以檢測(cè)細(xì)胞的死活，而三者的原理和所需的實(shí)驗(yàn)儀器試劑都是不同的。在實(shí)驗(yàn)教學(xué)過(guò)程中可以讓學(xué)生根據(jù)自己的興趣選擇其中的任意一種或多種方法，只有當(dāng)學(xué)生明確了實(shí)驗(yàn)原理、實(shí)驗(yàn)方法后，才可根據(jù)已確定的實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行儀器試劑的選擇。經(jīng)過(guò)這樣的自主選擇后，學(xué)生對(duì)實(shí)驗(yàn)原理和實(shí)驗(yàn)方法都有了很好的掌握。

在每一個(gè)試驗(yàn)中，始終貫徹科學(xué)的思維方法和實(shí)驗(yàn)方法，對(duì)于實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)中給出的具體的操作可做適當(dāng)?shù)恼{(diào)整或改變。如在植物細(xì)胞骨架的光學(xué)顯微鏡觀察這一實(shí)驗(yàn)中，細(xì)胞骨架制片效果的好壞與TritonX-100的濃度和處理時(shí)間密切相關(guān)。在上課時(shí)，講清楚在這一實(shí)驗(yàn)中的TritonX-100作用和原理，可以讓學(xué)生分組后改變TritonX-100的濃度和作用時(shí)間，其余步驟不變，然后比較實(shí)驗(yàn)效果，確定最佳條件。通過(guò)這個(gè)實(shí)驗(yàn)，學(xué)生不僅掌握了細(xì)胞骨架的制片技術(shù)，而且能透徹理解TritonX-100的作用原理，也使學(xué)生認(rèn)識(shí)到不能教條式照搬已有知識(shí)，培養(yǎng)其科學(xué)的思維和方法。

（三）逐步開(kāi)放實(shí)驗(yàn)內(nèi)容。依據(jù)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和實(shí)驗(yàn)條件，從驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)逐漸開(kāi)展不同程度的開(kāi)放性實(shí)驗(yàn)。首先，可以讓有興趣的學(xué)生共同參與實(shí)驗(yàn)前期準(zhǔn)備工作，在實(shí)驗(yàn)員準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)的時(shí)間，提前通知學(xué)生，在老師指導(dǎo)下學(xué)生自己準(zhǔn)備材料，如提供給學(xué)生洋蔥、蠶豆，自己培育根尖，配置實(shí)驗(yàn)所需的溶劑等。在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)中，讓學(xué)生和老師一起洗培養(yǎng)瓶，滅菌，配置培養(yǎng)基等，從而提高學(xué)生的實(shí)驗(yàn)技能，培養(yǎng)學(xué)習(xí)興趣，理解實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備工作的繁瑣，培養(yǎng)吃苦耐勞的品質(zhì)。其次，可開(kāi)放局部實(shí)驗(yàn)方案確定環(huán)節(jié)，培養(yǎng)學(xué)生的探索精神。最后，設(shè)置開(kāi)放實(shí)驗(yàn)，可讓學(xué)生自主設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)。老師提供多個(gè)可行的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目，將學(xué)生分成幾個(gè)小組，以小組的形式完成實(shí)驗(yàn)。這就要求學(xué)生主動(dòng)查閱相關(guān)文獻(xiàn)，設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，通過(guò)師生之間的討論后，制訂出可行的實(shí)驗(yàn)方案并予以實(shí)施，這非常有利于引導(dǎo)學(xué)生積極思考，激發(fā)學(xué)生探索欲望。

（四）課堂教學(xué)與課外科研工作相結(jié)合。二年級(jí)以上的本科生絕大多數(shù)都進(jìn)入了不同老師的科研實(shí)驗(yàn)室，而科研實(shí)驗(yàn)室的開(kāi)放可讓部分感興趣的同學(xué)在實(shí)驗(yàn)老師和科研實(shí)驗(yàn)室共同指導(dǎo)下自行設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，學(xué)生根據(jù)科研實(shí)驗(yàn)室條件和老師研究方向，查閱文獻(xiàn)，提出實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案，老師根據(jù)學(xué)生的知識(shí)結(jié)構(gòu)，對(duì)選題和實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)做出篩選，確定后在科研實(shí)驗(yàn)室完成這部分工作，最后做一次實(shí)驗(yàn)總結(jié)報(bào)告，計(jì)入平時(shí)成績(jī)。

四、完善成績(jī)綜合評(píng)定體系

根據(jù)實(shí)驗(yàn)課程的特點(diǎn)，應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)課全程跟蹤評(píng)定，包括出勤情況，課堂紀(jì)律，規(guī)范操作，實(shí)驗(yàn)態(tài)度，實(shí)驗(yàn)結(jié)果，實(shí)驗(yàn)報(bào)告，勞動(dòng)紀(jì)律，責(zé)任心等多方位對(duì)學(xué)生做出綜合評(píng)定。[4]可分為三個(gè)方面：平時(shí)成績(jī)，包括出勤率和課堂實(shí)驗(yàn)態(tài)度，操作規(guī)范情況等，培養(yǎng)學(xué)生良好的實(shí)驗(yàn)作風(fēng)，激發(fā)學(xué)生學(xué)習(xí)的積極性;實(shí)驗(yàn)結(jié)果，實(shí)驗(yàn)操作能反映學(xué)生的基本實(shí)驗(yàn)素養(yǎng)與動(dòng)手操作能力，主要通過(guò)考察學(xué)生的實(shí)驗(yàn)表現(xiàn)得到，對(duì)于一些操作性強(qiáng)的實(shí)驗(yàn)課可當(dāng)場(chǎng)記錄成績(jī)并計(jì)入最后的綜合考評(píng)中;實(shí)驗(yàn)報(bào)告，根據(jù)學(xué)生的實(shí)驗(yàn)報(bào)告來(lái)評(píng)定成績(jī)，綜合性實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)報(bào)告可以改成論文的格式，這就要求學(xué)生對(duì)實(shí)驗(yàn)原理、步驟、結(jié)果以及數(shù)據(jù)等做出總結(jié)，以提高總結(jié)能力。這樣，才能達(dá)到使學(xué)生加深理解細(xì)胞生物學(xué)基本理論知識(shí)，鍛煉學(xué)生的實(shí)際動(dòng)手能力，提高實(shí)驗(yàn)操作技能，培養(yǎng)學(xué)生的科技創(chuàng)新意識(shí)和綜合素質(zhì)的目的。

[ 注 釋 ]

[1] 陳媛媛，陳付學(xué)，華子儀，等.深化細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)改革，探索開(kāi)放式實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｊ絒J].教育教學(xué)論壇，2012（40）：60-61.

[2] 李小燕，劉江東，鄭凌，等.深化細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)改革 培養(yǎng)創(chuàng)新型人才[J].實(shí)驗(yàn)技術(shù)與管理，2011（4）：116-119，142.

第6篇：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)范文

關(guān)鍵詞：對(duì)蝦細(xì)胞 永生性轉(zhuǎn)化 研究進(jìn)展

中圖分類(lèi)號(hào)：R73 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1672-3791（2013）04（c）-0248-02

隨著對(duì)蝦人工養(yǎng)殖集約化的發(fā)展，對(duì)蝦病毒病日益頻繁爆發(fā)，對(duì)蝦細(xì)胞系是分離和純化對(duì)蝦病毒、研究病毒的致病機(jī)理、發(fā)展有效的診斷試劑和防控技術(shù)以及生產(chǎn)高效的病毒疫苗等的有利工具和研究技術(shù)。為建立對(duì)蝦細(xì)胞系，國(guó)內(nèi)外專(zhuān)家學(xué)者進(jìn)行了大量的探索和不懈的努力，對(duì)蝦細(xì)胞難以脫分化和有絲分裂壽命短是對(duì)蝦細(xì)胞一直未能成功建系的兩個(gè)制約性問(wèn)題。人們逐漸意識(shí)到，僅僅靠改進(jìn)對(duì)蝦細(xì)胞培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件可能難以實(shí)現(xiàn)對(duì)蝦細(xì)胞的永生性轉(zhuǎn)化。因此隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，逐漸有人開(kāi)始嘗試采用物理、化學(xué)和生物學(xué)方法來(lái)誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化對(duì)蝦的原代細(xì)胞，以期望獲得永生化的對(duì)蝦細(xì)胞系。

1 物理方法誘導(dǎo)對(duì)蝦原代培養(yǎng)細(xì)胞永生性轉(zhuǎn)化

X-射線、電離輻射和60Co射線處理可以誘導(dǎo)細(xì)胞遺傳物質(zhì)發(fā)生變異，從而干擾細(xì)胞的衰老機(jī)制，激活細(xì)胞永生性相關(guān)基因的表達(dá)，是哺乳動(dòng)物細(xì)胞常用的行之有效的永生性轉(zhuǎn)化物理誘導(dǎo)手段。1990年，Crane最早嘗試采用γ射線、x-射線和電離輻射處理原代培養(yǎng)的對(duì)蝦細(xì)胞以使之發(fā)生變異成為永生性的細(xì)胞系，但是沒(méi)有成功。雖然失敗了，但這是對(duì)蝦細(xì)胞永生性轉(zhuǎn)化道路上的一次很好的探索[1]。

2 化學(xué)方法誘導(dǎo)對(duì)蝦原代培養(yǎng)細(xì)胞永生性轉(zhuǎn)化

5-溴尿嘧啶（BU）、甲基磺酸乙酯（EMS）、和N-甲基-N′-亞硝基胍類(lèi)化合物（MNNG）等化學(xué)誘變劑都可引起細(xì)胞癌變，發(fā)生永生性轉(zhuǎn)化。2001年，郎剛?cè)A等應(yīng)用MNNG對(duì)中國(guó)明對(duì)蝦淋巴組織原代培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行多次化學(xué)誘變處理，雖然誘變后的細(xì)胞呈現(xiàn)多層生長(zhǎng)，并出現(xiàn)由成纖維樣變?yōu)樯掀拥绒D(zhuǎn)化特征，但沒(méi)有實(shí)現(xiàn)連續(xù)傳代[2]。

3 生物學(xué)方法誘導(dǎo)對(duì)蝦原代培養(yǎng)細(xì)胞永生性轉(zhuǎn)化

3.1 生長(zhǎng)因子

細(xì)胞生長(zhǎng)因子具有刺激細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖，抑制細(xì)胞分化的生物學(xué)特性。1995年，Hsu等首次采用堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）對(duì)斑節(jié)對(duì)蝦的淋巴細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化，發(fā)現(xiàn)經(jīng)誘導(dǎo)處理后的淋巴細(xì)胞不需飼養(yǎng)層就可生長(zhǎng)繁殖，并傳代超過(guò)90代[3]。但隨后該細(xì)胞系被證實(shí)為污染的單細(xì)胞真核生物（Thraustochytrids）。2002年，樊廷俊等在對(duì)蝦細(xì)胞培養(yǎng)基中同時(shí)添加了bFGF和胰島素樣生長(zhǎng)因子Ⅱ（IGF-II）以誘導(dǎo)中國(guó)明對(duì)蝦淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)化后的細(xì)胞在報(bào)道時(shí)已傳代培養(yǎng)4代，但并未見(jiàn)到成功建系的后續(xù)報(bào)道。雖然已有不少研究發(fā)現(xiàn)在添加生長(zhǎng)因子的情況下，對(duì)蝦細(xì)胞的生存和增殖能力獲得了不同程度的改善，但是目前還未發(fā)現(xiàn)哪一些生長(zhǎng)因子能支持對(duì)蝦細(xì)胞發(fā)生自發(fā)性轉(zhuǎn)化并獲得無(wú)限增殖能力。

3.2 細(xì)胞融合

通過(guò)細(xì)胞融合有可能獲得具有兩種親本細(xì)胞生物學(xué)特性的雜交細(xì)胞。將已成系的永生性細(xì)胞與對(duì)蝦細(xì)胞融合，有可能獲得具有無(wú)限增殖能力的對(duì)蝦細(xì)胞。2001年，樊廷俊和史振平將已成系的牙鲆鰓細(xì)胞（FG）與中國(guó)對(duì)蝦淋巴組織原代培養(yǎng)細(xì)胞，通過(guò)聚乙二醇（PEG）誘導(dǎo)融合法進(jìn)行雜交，篩選出可繼代培養(yǎng)的雜交細(xì)胞，并將雜交細(xì)胞傳代培養(yǎng)12次，但未見(jiàn)有該對(duì)蝦雜交細(xì)胞成系的后續(xù)報(bào)道[4]。2010年，Claydon等同樣采用PEG誘導(dǎo)融合法分別將鯉魚(yú)上皮瘤細(xì)胞系（EPC）和草地夜蛾蛹卵巢細(xì)胞系（Sf9）與對(duì)蝦血淋巴原代培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行融合，并成功篩選得到雜交細(xì)胞系，但是該細(xì)胞系缺乏甲殼綱動(dòng)物細(xì)胞體外病毒復(fù)制的關(guān)鍵成分不能用于對(duì)蝦病毒的研究，因而不能解決對(duì)蝦細(xì)胞建系的根本目的。

3.3 病毒癌基因

猿猴病毒40（SV40）是簡(jiǎn)單的真核細(xì)胞病毒，SV40的大T抗原（SV40LT）可抑制腫瘤抑制因子p53蛋白的活性，因而將SV40LT基因?qū)氩溉閯?dòng)物細(xì)胞中，可成功誘導(dǎo)細(xì)胞的永生性轉(zhuǎn)化[5]。1995年，Tapay等首次采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法成功將SV40LT基因轉(zhuǎn)染到南美藍(lán)對(duì)蝦原代培養(yǎng)淋巴細(xì)胞中，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染后淋巴細(xì)胞呈圓形，聚集成葡萄樣細(xì)胞團(tuán)，貼壁不緊，生長(zhǎng)速度加快，可傳代18～44次以上；而未轉(zhuǎn)染的淋巴原代細(xì)胞呈成纖維樣，貼壁緊，不能傳代。遺憾的是，最終也沒(méi)有成功建立對(duì)蝦淋巴細(xì)胞永生性的細(xì)胞系。2006年，胡國(guó)斌等利用復(fù)制缺陷型-泛嗜性逆轉(zhuǎn)錄病毒作為載體，也成功將SV40LT基因轉(zhuǎn)染到中國(guó)對(duì)蝦原代培養(yǎng)淋巴細(xì)胞中，轉(zhuǎn)基因細(xì)胞呈現(xiàn)了轉(zhuǎn)化特征，但傳代細(xì)胞由于真菌污染未能保留下來(lái)。

人狀多瘤病毒（human papilloma virus，HPV）的E6和E7基因編碼的E6和E7蛋白可分別與抑癌基因p53和Rb結(jié)合，從而影響細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移和細(xì)胞周期，誘發(fā)細(xì)胞永生性轉(zhuǎn)化。2008年，Claydon將HPV的E6和E7基因轉(zhuǎn)染到紅螯螯蝦的原代培養(yǎng)細(xì)胞中，結(jié)果發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染細(xì)胞可存活4個(gè)月，但存活的對(duì)蝦細(xì)胞不分裂[6]。

4 前景展望

成功建立對(duì)蝦連續(xù)性細(xì)胞系的關(guān)鍵問(wèn)題之一是對(duì)蝦培養(yǎng)細(xì)胞的永生性轉(zhuǎn)化。哺乳動(dòng)物細(xì)胞中端粒酶活性的有無(wú)決定了細(xì)胞壽命的長(zhǎng)短。腫瘤細(xì)胞的端粒酶常常被激活而獲得永生性。Lang等（2004）報(bào)道，對(duì)蝦細(xì)胞中可檢測(cè)到端粒酶活性，而且日本對(duì)蝦淋巴組織原代培養(yǎng)細(xì)胞的端粒酶的活性可以維持30天[7]。但Jayesh（2012）在對(duì)蝦原代培養(yǎng)細(xì)胞中卻并未檢測(cè)到端粒酶活性。因此，通過(guò)轉(zhuǎn)染端粒酶基因是否能夠提高體外培養(yǎng)對(duì)蝦細(xì)胞的壽命，以獲得永生性對(duì)蝦細(xì)胞系尚有待進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。

分子重編程技術(shù)是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種通過(guò)在細(xì)胞中過(guò)表達(dá)多能性因子來(lái)實(shí)現(xiàn)分化細(xì)胞向多能干細(xì)胞逆轉(zhuǎn)的技術(shù)。2006年，山中伸彌領(lǐng)導(dǎo)的研究小組利用逆轉(zhuǎn)錄病毒基因轉(zhuǎn)移技術(shù)，將4個(gè)多能性轉(zhuǎn)錄因子（Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc）共轉(zhuǎn)染到小鼠成纖維細(xì)胞中，成功誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞的去分化，并重編程為多能干細(xì)（即iPS細(xì)胞），而且所獲得的iPS細(xì)胞有高達(dá)50%的動(dòng)物致瘤性。因此，將分子重編程技術(shù)應(yīng)用于對(duì)蝦細(xì)胞，以實(shí)現(xiàn)對(duì)蝦細(xì)胞的脫分化與永生性轉(zhuǎn)化，不失為今后對(duì)蝦細(xì)胞建系的一個(gè)新的研究方向和突破口。

對(duì)蝦永生性細(xì)胞系的建立是一個(gè)不斷探索的過(guò)程，可能需要漫長(zhǎng)的時(shí)間。目前，盡管對(duì)蝦細(xì)胞永生性轉(zhuǎn)化未取得成功，但實(shí)驗(yàn)中的嘗試和探索為最終實(shí)現(xiàn)體外培養(yǎng)對(duì)蝦細(xì)胞的永生性轉(zhuǎn)化奠定了基礎(chǔ)，并為以后的研究和發(fā)展提供了經(jīng)驗(yàn)和借鑒。

參考文獻(xiàn)

[1] Crane，M St J.Mutagensis and cell transformation in cell culture[J].Methods in Cell Science，1999，21：245-253.

[2] 郎剛?cè)A，王勇，陳西廣，等.中國(guó)對(duì)蝦淋巴組織的長(zhǎng)期原代培養(yǎng)和化學(xué)誘變初探[J].青島海洋大學(xué)學(xué)報(bào)，2001，31（3）：411-414.

[3] Hsu Y-L，et al.Development of an in vitro subculture system for the oka organ（Lymphoid tissue）of Penaeus monodon[J].Aquaculture，1995，136： 43-55.

[4] 樊廷俊，史振平.牙鲆鰓細(xì)胞與中國(guó)對(duì)蝦淋巴細(xì)胞雜交細(xì)胞的體外培養(yǎng)[J]. 水產(chǎn)學(xué)報(bào)，2001，25（1）：11-15.

[5] Berthon P，Goubin G，Dutrillaux B，et al.Single-step transformation of human breast epithelial cells by SV40 large T oncogene[J].Int J Cancer， 1992，52（1）：92-97.

第7篇：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)范文

【關(guān)鍵詞】動(dòng)物細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn) 教學(xué)改革 研究型大學(xué)

【基金項(xiàng)目】由寧夏回族自治區(qū)高等學(xué)校細(xì)胞生物學(xué)精品課程（2012年），寧夏回族自治區(qū)細(xì)胞生物學(xué)雙語(yǔ)教學(xué)示范課程（2011年），寧夏大學(xué)細(xì)胞生物學(xué)精品課程（2009年）資助。

【中圖分類(lèi)號(hào)】G42 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】2095-3089（2013）06-0244-02

1.引言

寧夏大學(xué)是寧夏回族自治區(qū)人民政府與教育部共建的綜合性大學(xué)，國(guó)家“211工程”重點(diǎn)建設(shè)高校，是我國(guó)西部重點(diǎn)建設(shè)的一所學(xué)校。為把寧夏大學(xué)建設(shè)成為區(qū)域特色鮮明、服務(wù)地方能力較強(qiáng)的高水平教學(xué)研究型大學(xué)，提高辦學(xué)質(zhì)量，推進(jìn)產(chǎn)學(xué)研創(chuàng)新，尤為重要。而生物技術(shù)專(zhuān)業(yè)系寧夏大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院重點(diǎn)建設(shè)專(zhuān)業(yè)。生物技術(shù)專(zhuān)業(yè)不僅僅是一門(mén)新興學(xué)科，更是一門(mén)實(shí)驗(yàn)性、實(shí)踐性非常強(qiáng)的學(xué)科，為了更好地適應(yīng)市場(chǎng)經(jīng)濟(jì)的社會(huì)大環(huán)境，對(duì)該專(zhuān)業(yè)人才培養(yǎng)的要求不僅僅是要有較深厚的理論基礎(chǔ)和較寬廣的知識(shí)面，更要有較強(qiáng)的實(shí)驗(yàn)、實(shí)踐和創(chuàng)新能力。而高素質(zhì)創(chuàng)新人才的培養(yǎng)則是從事生物技術(shù)專(zhuān)業(yè)人才培養(yǎng)教育工作者急需探討和解決的問(wèn)題。

動(dòng)物細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)技術(shù)是生物技術(shù)專(zhuān)業(yè)的一門(mén)非常重要的必修課之一，它充當(dāng)了基礎(chǔ)知識(shí)與生產(chǎn)實(shí)踐相結(jié)合的橋梁[1]，在生物醫(yī)藥、動(dòng)物品種改良等方面具有重要的應(yīng)用價(jià)值。該課程的學(xué)習(xí)對(duì)于全面深入掌握生物技術(shù)領(lǐng)域中的基本理論和技術(shù)具有不可忽視的意義，因此，作為一門(mén)專(zhuān)業(yè)主干課其實(shí)踐性和應(yīng)用性很強(qiáng)。

但其內(nèi)容繁雜，技術(shù)難度大，隨著細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)技術(shù)的突飛猛進(jìn)，應(yīng)用細(xì)胞工程技術(shù)可以在細(xì)胞和分子水平上改良現(xiàn)有生物品種以及培育新品種[1]，所以，緊密聯(lián)系生產(chǎn)實(shí)踐和科學(xué)研究最前沿為動(dòng)物細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)課特色。而原有的課程體系、實(shí)驗(yàn)教學(xué)方法等已不能滿足日新月異的社會(huì)發(fā)展需求。因此，要想使同學(xué)們真正掌握這門(mén)課程的要領(lǐng)，以適應(yīng)研究型大學(xué)的改革需求，培育出高素質(zhì)的復(fù)合型人才，及時(shí)更新動(dòng)物細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)技術(shù)專(zhuān)業(yè)課程的教學(xué)內(nèi)容，改進(jìn)教學(xué)方法與手段，對(duì)于提高教學(xué)效果、培養(yǎng)高素質(zhì)的專(zhuān)業(yè)人才具有十分重要的意義。借鑒于此，本文對(duì)該課程的教學(xué)改革進(jìn)行了如下的探討。

2.教學(xué)形式

2.1實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)采取項(xiàng)目申請(qǐng)立項(xiàng)制

在進(jìn)行《動(dòng)物細(xì)胞工程》理論課程教學(xué)時(shí)，結(jié)合實(shí)驗(yàn)需求，安排學(xué)生結(jié)合自己的興趣愛(ài)好，設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案。比如，在講述完畢動(dòng)物細(xì)胞與組織培養(yǎng)課程時(shí)，要求學(xué)生自由組合，結(jié)合理論課程設(shè)計(jì)一個(gè)完整的動(dòng)物細(xì)胞系的實(shí)驗(yàn)方案。具體內(nèi)容包括，實(shí)驗(yàn)材料的準(zhǔn)備以及經(jīng)費(fèi)預(yù)算，細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)溶液的配置、細(xì)胞原代培養(yǎng)與傳代、細(xì)胞生長(zhǎng)特性的鑒定、細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇以及污染的排除，同時(shí)包括人員組合以及實(shí)驗(yàn)分工。培養(yǎng)學(xué)生科研項(xiàng)目立項(xiàng)申請(qǐng)的科研素養(yǎng)，以適應(yīng)研究型大學(xué)的改革需求。

在項(xiàng)目申請(qǐng)中，除了要求學(xué)生理清技術(shù)路線外，重點(diǎn)要求學(xué)生凝練出項(xiàng)目目標(biāo)以及擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題以及對(duì)實(shí)驗(yàn)過(guò)程可能遇到的問(wèn)題進(jìn)行分析和討論，提出解決方案，提高學(xué)生分析問(wèn)題、解決問(wèn)題的能力，培養(yǎng)了學(xué)生獨(dú)立思考解決問(wèn)題的積極性；同時(shí)，通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)人員組合和分工的訓(xùn)練，培養(yǎng)了學(xué)生團(tuán)隊(duì)意識(shí)以及互助合作的精神，更為重要的是，克服了傳統(tǒng)教學(xué)中，所有實(shí)驗(yàn)器儀器和材料均由老師準(zhǔn)備，而學(xué)生只要按照老師指定的實(shí)驗(yàn)步驟逐一模仿去做的單一模式的弊端。

項(xiàng)目申請(qǐng)撰寫(xiě)完畢，由教師修改指出實(shí)驗(yàn)原則的缺陷，督促學(xué)生加以改進(jìn)，然后，結(jié)合學(xué)生自由組合分組，進(jìn)行幻燈片制作，模擬項(xiàng)目立項(xiàng)申請(qǐng)答辯進(jìn)行交流匯報(bào)，由同學(xué)和老師充當(dāng)項(xiàng)目評(píng)議專(zhuān)家，重點(diǎn)指出實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)上的不足，這樣在討論中讓學(xué)生對(duì)自己的實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵蟾用鞔_，實(shí)驗(yàn)思路更加清晰[2]。

2.2實(shí)驗(yàn)操作注意事項(xiàng)

通過(guò)模擬項(xiàng)目立項(xiàng)申請(qǐng)答辯通過(guò)后，經(jīng)教師修改后即可進(jìn)入實(shí)驗(yàn)操作。學(xué)生按組進(jìn)行實(shí)驗(yàn)材料、器材的準(zhǔn)備，包括對(duì)所需器具的清洗和滅菌處理。同時(shí)，按實(shí)驗(yàn)所需配制試劑，按照實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。試驗(yàn)操作除了注意提高無(wú)菌操作意識(shí)之外，注意生物廢棄物的合理排放以及學(xué)生自身的安全，樹(shù)立生物安全意識(shí)。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，實(shí)驗(yàn)室均采取開(kāi)放式的原則，學(xué)生可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行實(shí)驗(yàn)以及記錄觀察等。

2.3實(shí)驗(yàn)報(bào)告論文撰寫(xiě)及問(wèn)題分析與總結(jié)

實(shí)驗(yàn)報(bào)告論文要求學(xué)生嚴(yán)格按照科技論文的格式書(shū)寫(xiě)代替?zhèn)鹘y(tǒng)的實(shí)驗(yàn)報(bào)告形式。比如建立細(xì)胞系實(shí)驗(yàn)，在撰寫(xiě)科技論文時(shí)要求學(xué)生注意以下幾個(gè)方面：引言部分要求學(xué)生除了簡(jiǎn)單介紹實(shí)驗(yàn)原理和目的之外，重點(diǎn)比較動(dòng)物細(xì)胞原代培養(yǎng)與細(xì)胞純化的不同方法，同時(shí)寫(xiě)出所選方法的科學(xué)理論依據(jù)。其次，結(jié)果與討論為重點(diǎn)部分，此部分內(nèi)容要求學(xué)生結(jié)合理論知識(shí)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析和總結(jié)歸納，分析在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中所遇到的問(wèn)題，并且分析原因，提出改進(jìn)辦法[2]。這種科技論文的形式取代傳統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)報(bào)告，有助于學(xué)生撰寫(xiě)科技論文的寫(xiě)作，提高了學(xué)生的科研素養(yǎng)以及分析問(wèn)題解決問(wèn)題的能力，為創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)、畢業(yè)設(shè)計(jì)的實(shí)施奠定了扎實(shí)的基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，對(duì)此次實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行歸納總結(jié)。對(duì)所出現(xiàn)問(wèn)題中，比較典型的進(jìn)行詳細(xì)分析。

3.教學(xué)方法

3.1 加強(qiáng)多媒體教學(xué)，提高學(xué)生學(xué)習(xí)興趣

發(fā)揮信息化優(yōu)勢(shì)，彌補(bǔ)傳統(tǒng)教學(xué)缺陷，是動(dòng)物細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)信息化教學(xué)改革的有效途徑。動(dòng)物細(xì)胞工程實(shí)踐性很強(qiáng)，涉及的實(shí)驗(yàn)內(nèi)容很多，如動(dòng)物細(xì)胞的原代培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)以及冷凍保存技術(shù)、細(xì)胞融合與單克隆抗體制備技術(shù)、動(dòng)物克隆與核移植技術(shù)、胚胎移植技術(shù)、胚胎切割技術(shù)、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物技術(shù)等的一些基本技術(shù)操作，一一安排實(shí)驗(yàn)或者實(shí)踐實(shí)習(xí)，在高等學(xué)校不切合實(shí)際。所以采用多媒體教學(xué)非常重要，通過(guò)圖片、錄像、實(shí)驗(yàn)專(zhuān)題片彌補(bǔ)一些實(shí)驗(yàn)無(wú)法開(kāi)設(shè)的缺陷，開(kāi)拓學(xué)生的眼界。

筆者在動(dòng)物細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)的教學(xué)中，積極收集多媒體課件、圖片、錄像等，將新收集的一些圖片、照片等添加到課件中，盡量多用圖片或照片提高學(xué)生的學(xué)習(xí)積極性。同時(shí)利用網(wǎng)絡(luò)教學(xué)平臺(tái)，將國(guó)內(nèi)外新發(fā)表的動(dòng)物細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)相關(guān)的論文、實(shí)驗(yàn)網(wǎng)站等上傳到網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)，供師生學(xué)習(xí)和科研參考。

3.2 加強(qiáng)學(xué)科團(tuán)隊(duì)建設(shè)和年輕教師的培養(yǎng)，提高授課水平和教學(xué)質(zhì)量

動(dòng)物細(xì)胞工程整合了眾多學(xué)科的相關(guān)內(nèi)容，跟蹤現(xiàn)代生命科學(xué)技術(shù)的前沿領(lǐng)域，教學(xué)難度較大，需要多學(xué)科的基礎(chǔ)知識(shí)。所以，必須有一支結(jié)構(gòu)層次合理、理論知識(shí)扎實(shí)、專(zhuān)業(yè)技能精湛的教師隊(duì)伍，才能滿足教學(xué)工作的需要。因此，重視培養(yǎng)教師的治學(xué)態(tài)度、授課藝術(shù)、實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)以及對(duì)現(xiàn)代教育技術(shù)手段的應(yīng)用能力在很大程度上決定了教學(xué)的質(zhì)量和效果。

3.3 重視硬件和平臺(tái)建設(shè)，注重學(xué)生動(dòng)物細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)實(shí)際應(yīng)用能力和研究創(chuàng)新能力的培養(yǎng)

隨著生命科學(xué)的發(fā)展，對(duì)科研條件的要求標(biāo)準(zhǔn)也在提高。動(dòng)物細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)是生物技術(shù)專(zhuān)業(yè)教學(xué)、科研的重要技術(shù)支撐。所以重視動(dòng)物細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)研究平臺(tái)的建設(shè)，對(duì)于生物技術(shù)學(xué)科的發(fā)展及我校科研實(shí)力的提升具有重要意義。

目前我校西部特色生物資源保護(hù)與利用教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，基本滿足現(xiàn)有教學(xué)和科研的需要。根據(jù)學(xué)校的優(yōu)勢(shì)學(xué)科建設(shè)情況，開(kāi)設(shè)了細(xì)胞系建立等實(shí)驗(yàn)內(nèi)容，以培養(yǎng)學(xué)生的實(shí)驗(yàn)動(dòng)手能力，熏陶和培養(yǎng)學(xué)生進(jìn)行科學(xué)研究的基本素養(yǎng)。

4.教學(xué)質(zhì)量和效果的評(píng)價(jià)

通過(guò)對(duì)動(dòng)物細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)教學(xué)的改革初探，取得了一定的效果，主要表現(xiàn)在[2-4]：

4.1教師授課的效果

通過(guò)近幾年的努力，我校細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)教學(xué)的教學(xué)團(tuán)隊(duì)不斷壯大，教師準(zhǔn)備充分，授課藝術(shù)提高，學(xué)生對(duì)教師的評(píng)價(jià)滿意度也逐年增加，取得了比較好的教學(xué)效果。

從學(xué)生上課聽(tīng)講熱情、上課跟隨老師的反應(yīng)、互動(dòng)以及在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的動(dòng)手操作能力、操作細(xì)節(jié)等方面的觀察，教學(xué)效果比較理想。

4.2學(xué)生的知識(shí)掌握情況

通過(guò)教學(xué)改革，學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣明顯提高，除了對(duì)理論知識(shí)有較為扎實(shí)的掌握，更為重要的是，學(xué)生能夠?qū)⒗碚撝R(shí)應(yīng)用到實(shí)驗(yàn)實(shí)踐過(guò)程中去，同時(shí)，能夠運(yùn)用所掌握的知識(shí)分析實(shí)驗(yàn)過(guò)程中所遇到的問(wèn)題，即分析和解決問(wèn)題的能力有所提高。大學(xué)生創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)水平明顯提高，學(xué)生查閱資料、利用細(xì)胞工程的理論和知識(shí)解決問(wèn)題的能力有了顯著提高。比如在實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)時(shí)，要求學(xué)生自己設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，通過(guò)立項(xiàng)申請(qǐng)的方式確定實(shí)驗(yàn)方案，人員比例以及經(jīng)費(fèi)預(yù)算等各個(gè)環(huán)節(jié)，這就要求學(xué)生在實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)的同時(shí)，必須理清方案設(shè)計(jì)的理論依據(jù)，同時(shí)也培養(yǎng)了學(xué)生充分利用網(wǎng)絡(luò)資源查閱資料、閱讀文獻(xiàn)的能力。

4.3學(xué)生的實(shí)驗(yàn)技能掌握情況

學(xué)生在開(kāi)展實(shí)驗(yàn)前必須充分應(yīng)用理論知識(shí)和已掌握的技能，完成整個(gè)實(shí)驗(yàn)，包括實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)、實(shí)驗(yàn)操作的步驟、儀器和材料的選擇、人員分工的協(xié)調(diào)、結(jié)果的分析與討論以及論文的撰寫(xiě)等。均要求學(xué)生要有嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)研究態(tài)度，調(diào)動(dòng)了學(xué)生的主動(dòng)性，對(duì)于學(xué)生科學(xué)素質(zhì)的培養(yǎng)以及綜合能力的提高大有裨益。比如，在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后要求學(xué)生按照科技論文的形式撰寫(xiě)實(shí)驗(yàn)結(jié)題報(bào)告，訓(xùn)練了學(xué)生撰寫(xiě)科研論文的基本功，為學(xué)生畢業(yè)設(shè)計(jì)打下堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)，同時(shí)使學(xué)生具備了從事科學(xué)研究的基本素養(yǎng)。

4.4其他方面

通過(guò)對(duì)動(dòng)物細(xì)胞工程課程的開(kāi)設(shè)，有效的培養(yǎng)了學(xué)生的動(dòng)手能力和邏輯思維能力，一方面，加強(qiáng)了教師和學(xué)生之間的交流，增進(jìn)了師生之間的感情；同時(shí)，自由組合立項(xiàng)申請(qǐng)的方式，增強(qiáng)了學(xué)生的責(zé)任心，提高了學(xué)習(xí)興趣，而在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中各同學(xué)之間相互協(xié)調(diào)合作，增進(jìn)了同學(xué)之間團(tuán)結(jié)、互助的精神，團(tuán)隊(duì)意識(shí)增強(qiáng)。另一方面，這種立項(xiàng)申請(qǐng)的改革實(shí)驗(yàn)教學(xué)模式，反映了當(dāng)代科學(xué)技術(shù)的發(fā)展水平，涉及的知識(shí)面廣。這就要求教師不僅要有本學(xué)科扎實(shí)的理論基礎(chǔ)、較好的實(shí)驗(yàn)技能，還要加強(qiáng)業(yè)務(wù)學(xué)習(xí)，不斷更新自己的知識(shí)，因此，提高了師資隊(duì)伍的業(yè)務(wù)水平。

5.存在的問(wèn)題與改進(jìn)措施

5.1實(shí)驗(yàn)室配套設(shè)施尚需進(jìn)一步完善

由于實(shí)驗(yàn)以自由組合的立項(xiàng)申請(qǐng)的形式開(kāi)展實(shí)驗(yàn)，對(duì)儀器設(shè)備需求加強(qiáng)。

5.2加大與科學(xué)研究相結(jié)合的力度

實(shí)驗(yàn)要求學(xué)生自己準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)材料和試劑，與教師統(tǒng)一準(zhǔn)備相比較加大了實(shí)驗(yàn)費(fèi)用開(kāi)支。因此，加大與科學(xué)研究相結(jié)合的力度尤為重要。同時(shí)，科研和學(xué)科的發(fā)展密切相關(guān)，科研內(nèi)容又可促進(jìn)實(shí)驗(yàn)教學(xué)內(nèi)容的更新以及教學(xué)質(zhì)量的提高。鼓勵(lì)學(xué)生直接參與教師的科研課題中去，是培養(yǎng)學(xué)生自主學(xué)習(xí)和創(chuàng)新意識(shí)的有效途徑之一。

如果教師在教學(xué)中引用自己的科研成果，以解釋實(shí)驗(yàn)中的相關(guān)問(wèn)題，使課堂與科學(xué)研究的距離拉近，引起學(xué)生對(duì)該學(xué)科的興趣和更大重視。

6.結(jié)語(yǔ)

實(shí)驗(yàn)教學(xué)與課堂理論教學(xué)相比，更有利于培養(yǎng)學(xué)生的創(chuàng)新能力。而要真正上好實(shí)驗(yàn)課并不是一件容易的事，還有很多問(wèn)題需要不斷地探索和實(shí)踐。因此，需要教師不斷地提高業(yè)務(wù)水平的同時(shí)，更要以極高的熱情、更多的精力投入到教學(xué)實(shí)踐過(guò)程中。

參考文獻(xiàn)：

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作者簡(jiǎn)介：

第8篇：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)范文

摘 要 細(xì)胞工程是生物工程專(zhuān)業(yè)的一門(mén)專(zhuān)業(yè)基礎(chǔ)課，細(xì)胞工程課程組對(duì)細(xì)胞工程課程的教學(xué)內(nèi)容、教學(xué)方法和考核方式等進(jìn)行了一系列的探索與改革，制定了課程質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，修訂了課程教學(xué)大綱，為生物工程專(zhuān)業(yè)學(xué)生的培養(yǎng)奠定了一定的專(zhuān)業(yè)基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞 細(xì)胞工程 課程改革 教學(xué)改革

中圖分類(lèi)號(hào)：G642 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A DOI：10.16400/ki.kjdkz.2015.08.024

Exploration and Thinking of Biological Engineering

Cell Engineering Course Teaching Reform

SHAO Jingxia， YANG Shushen， XU Hong， MA Ruili， ZHANG Xiaohong

（College of Life Sciences， Northwest A& F University， Yangling， Shaanxi 712100）

Abstract： Cell engineering biological engineering professional a basic course， cell engineering course group of cell engineering course content， teaching methods and assessment methods carried out a series of exploration and reform， develop a curriculum quality standards， revised the course syllabus for the cultivation of bio-engineering students laid a professional basis.

Keywords： cell engineering; course reform; teaching reform

生物工程是一門(mén)新興的集生物學(xué)、化學(xué)、醫(yī)學(xué)、工程學(xué)等為一體的邊緣交叉學(xué)科。我校生物工程專(zhuān)業(yè)始建于1999年，細(xì)胞工程課程是生物工程專(zhuān)業(yè)的一門(mén)專(zhuān)業(yè)課，是應(yīng)用性、實(shí)踐性很強(qiáng)的學(xué)科。根據(jù)生物工程專(zhuān)業(yè)人才培養(yǎng)的目標(biāo)， 在多年的教學(xué)和實(shí)踐過(guò)程中，筆者對(duì)細(xì)胞工程課程內(nèi)容和結(jié)構(gòu)進(jìn)行了較為全面的改革和探索，以期完善人才培養(yǎng)的知識(shí)結(jié)構(gòu)，滿足本專(zhuān)業(yè)學(xué)生課程學(xué)習(xí)的需求，培養(yǎng)知識(shí)全面的合格人才，切實(shí)提高學(xué)生的創(chuàng)新與實(shí)踐能力。

1 合理構(gòu)建課程體系

1.1 適應(yīng)專(zhuān)業(yè)要求，調(diào)整教學(xué)內(nèi)容

細(xì)胞工程是生物工程專(zhuān)業(yè)的一門(mén)專(zhuān)業(yè)課，由于師資及實(shí)驗(yàn)條件限制，最初細(xì)胞工程課程內(nèi)容主要講述植物細(xì)胞工程，其內(nèi)容主要包括：植物細(xì)胞的全能性理論及其實(shí)現(xiàn)途徑，植物細(xì)胞的脫分化和再分化理論，器官分化和體細(xì)胞胚胎發(fā)生的途徑與方式，植物細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)室組成和無(wú)菌操作技術(shù)，植物離體無(wú)性繁殖和脫病毒技術(shù)，植物胚胎培養(yǎng)和單倍體誘導(dǎo)技術(shù)，原生質(zhì)體培養(yǎng)和體細(xì)胞雜交，植物細(xì)胞培養(yǎng)及次生代謝產(chǎn)物的生產(chǎn)，體細(xì)胞無(wú)性系變異和突變體篩選，種質(zhì)資源離體保存和植物遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)。隨著專(zhuān)業(yè)的快速發(fā)展和學(xué)生知識(shí)結(jié)構(gòu)的需求，對(duì)課程內(nèi)容的要求也在不斷拓展。近幾年我們?cè)黾恿藙?dòng)物細(xì)胞工程的理論，其內(nèi)容涉及動(dòng)、植物細(xì)胞和組織的培養(yǎng)技術(shù)，細(xì)胞融合技術(shù)，胚胎移植、動(dòng)物克隆、體外受精、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物等技術(shù)以及細(xì)胞工程技術(shù)在農(nóng)業(yè)、工業(yè)和醫(yī)藥等領(lǐng)域的應(yīng)用。

1.2 立足基本原理，突出專(zhuān)業(yè)應(yīng)用

我們?cè)谟懻撜n程大綱及課程質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)確定了該門(mén)課程主要包含基本原理、基本技術(shù)、實(shí)踐應(yīng)用三部分，壓縮了原理和理論講授學(xué)時(shí)，加大了知識(shí)應(yīng)用學(xué)時(shí)，例如學(xué)習(xí)了細(xì)胞全能性理論知識(shí)，我們把如何利用這一原理進(jìn)行植物快繁、細(xì)胞培養(yǎng)、種質(zhì)保存等作為重點(diǎn)內(nèi)容。調(diào)整課堂講述內(nèi)容的同時(shí)，增加了實(shí)驗(yàn)課和實(shí)習(xí)的學(xué)時(shí)，使課程結(jié)構(gòu)更加適應(yīng)專(zhuān)業(yè)學(xué)習(xí)需求，突出了工科課程的專(zhuān)業(yè)應(yīng)用。

1.3 編制課程標(biāo)準(zhǔn)，規(guī)范教學(xué)內(nèi)容

細(xì)胞工程課程大綱經(jīng)過(guò)了2004年、2008年、2012年和2014年4次修訂，生物工程教研室對(duì)細(xì)胞工程課程內(nèi)容、實(shí)驗(yàn)、實(shí)習(xí)等環(huán)節(jié)進(jìn)行了廣泛的討論，同時(shí)也聽(tīng)取和參考了其他高校同行的建議，編寫(xiě)了細(xì)胞工程課程質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，首先確定了學(xué)生通過(guò)本課程的教學(xué)應(yīng)實(shí)現(xiàn)以下目標(biāo)：①了解細(xì)胞工程課程在生物學(xué)科中的地位及發(fā)展情況;②了解細(xì)胞工程的基本理論依據(jù)及該課程在國(guó)內(nèi)外的進(jìn)展與發(fā)展趨勢(shì);③使學(xué)生理解和掌握動(dòng)植物細(xì)胞工程的基本理論知識(shí)和各種操作技術(shù)的基本原理及技術(shù)路線;④使學(xué)生能夠靈活運(yùn)用所學(xué)的基礎(chǔ)理論知識(shí)，發(fā)現(xiàn)、分析并解決實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中的具體問(wèn)題;⑤提高學(xué)生分析問(wèn)題、解決問(wèn)題的能力，為以后更好地應(yīng)用細(xì)胞工程技術(shù)奠定堅(jiān)實(shí)的理論和技術(shù)基礎(chǔ)。圍繞課程培養(yǎng)目標(biāo)確定了細(xì)胞工程課程共十五章的講述內(nèi)容;同時(shí)進(jìn)一步規(guī)范了該門(mén)課程的考核環(huán)節(jié)和實(shí)施程序，使今后的課程考核更加全面和科學(xué)。

2 改進(jìn)教學(xué)方法，利用現(xiàn)代化教學(xué)手段，提高教學(xué)效果

2.1 采用多種教學(xué)方法，調(diào)動(dòng)學(xué)生學(xué)習(xí)的積極性

生物工程專(zhuān)業(yè)本科的細(xì)胞工程課程在三年級(jí)第二學(xué)期開(kāi)設(shè)，學(xué)生已經(jīng)具備相關(guān)的專(zhuān)業(yè)基礎(chǔ)知識(shí)。因此教師在課堂授課過(guò)程中，綜合采用啟發(fā)式、比較式、互動(dòng)式和討論法等多種教學(xué)方式，充分調(diào)動(dòng)學(xué)生的積極性，實(shí)現(xiàn)學(xué)生對(duì)理論知識(shí)的更好理解和掌握。如在講述細(xì)胞工程理論時(shí)，首先提問(wèn)學(xué)生為什么細(xì)胞具有全能性，各種不同細(xì)胞類(lèi)型實(shí)現(xiàn)全能性的能力為什么不同？并引入課堂討論-植物離體培養(yǎng)中如何實(shí)現(xiàn)植物細(xì)胞的全能性？在講述細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，我們首先讓學(xué)生比較植物細(xì)胞、動(dòng)物細(xì)胞與微生物細(xì)胞的結(jié)構(gòu)、功能的不同;在講述人工種子時(shí)，引入課堂討論-體細(xì)胞胚胎與合子胚的異同點(diǎn)？通過(guò)這些方式充分調(diào)動(dòng)他們探索未知領(lǐng)域的主觀能動(dòng)性和創(chuàng)造性思維，激發(fā)學(xué)生的求知欲，激勵(lì)學(xué)生積極參與到教學(xué)過(guò)程中，真正讓學(xué)生成為課堂的主體。

2.2 充分利用多媒體教學(xué)手段，提高學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣

計(jì)算機(jī)輔助教學(xué)作為現(xiàn)代化的教學(xué)手段，在改革教學(xué)模式、優(yōu)化教學(xué)內(nèi)容、提高學(xué)生的學(xué)習(xí)效率等方面有重要的作用。細(xì)胞工程課程內(nèi)容多，信息量大，應(yīng)用性和實(shí)踐性很強(qiáng)，又涉及多種實(shí)驗(yàn)技能。根據(jù)細(xì)胞工程課程的特點(diǎn)與教學(xué)內(nèi)容要求，為了使學(xué)生在有限的課時(shí)內(nèi)取得更好的學(xué)習(xí)效果，在教學(xué)過(guò)程中，授課教師采用傳統(tǒng)板書(shū)和多媒體教學(xué)相結(jié)合的手段。在平時(shí)的教學(xué)實(shí)踐中，授課教師就非常注重各種素材的收集和加工，自制或搜集相關(guān)的視頻和動(dòng)畫(huà)，在課程教學(xué)和實(shí)驗(yàn)教學(xué)中均使用多媒體課件。如利用圖片展示污染、褐變、玻璃化等現(xiàn)象，使學(xué)生可以直觀地分辨到各種限制植物組織培養(yǎng)的因素;用動(dòng)畫(huà)的方法進(jìn)行演示胚胎干細(xì)胞的誘導(dǎo)分化及單克隆抗體的制備過(guò)程，使學(xué)生更容易理解和掌握這些較抽象的內(nèi)容;通過(guò)視頻等方式介紹原生質(zhì)體的分離，細(xì)胞融合等過(guò)程，可以把一些學(xué)生容易忽略、較抽象、不易觀察到的重要操作技術(shù)直觀地演示出來(lái)。利用板書(shū)繪制離體培養(yǎng)條件下，小孢子發(fā)育成植物體的途徑和原生質(zhì)體融合的不同產(chǎn)物，以加深學(xué)生的理解。傳統(tǒng)和現(xiàn)代教學(xué)手段相結(jié)合，加強(qiáng)理論和實(shí)際的聯(lián)系，取得了明顯的教學(xué)效果。

同時(shí)，我們也完善了細(xì)胞工程課程的網(wǎng)上資源，包括教學(xué)大綱、多媒體課件、思考題和試題庫(kù)等，方便學(xué)生課后復(fù)習(xí)。

3 加強(qiáng)實(shí)踐教學(xué)，鞏固教學(xué)成果

細(xì)胞工程是一門(mén)應(yīng)用性、實(shí)踐性很強(qiáng)的課程，我們注重理論課教學(xué)的同時(shí)，不斷完善實(shí)踐教學(xué)體系。通過(guò)多年的教學(xué)實(shí)踐，已經(jīng)建立起了包括課程實(shí)驗(yàn)和生產(chǎn)實(shí)習(xí)兩個(gè)方面的實(shí)踐教學(xué)體系。

保留基礎(chǔ)性實(shí)驗(yàn)內(nèi)容，如培養(yǎng)基配制、初代培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)、培養(yǎng)物觀察等內(nèi)容，以培養(yǎng)和訓(xùn)練學(xué)生最基本實(shí)驗(yàn)技能。在有限的實(shí)驗(yàn)課課時(shí)和現(xiàn)有實(shí)驗(yàn)條件下，對(duì)原有短時(shí)間的、驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)進(jìn)行整合和優(yōu)化，合理規(guī)劃實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和環(huán)節(jié)，使實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)銜接緊密。如實(shí)驗(yàn)室的顯微鏡和解剖鏡是按照兩個(gè)同學(xué)一組的標(biāo)準(zhǔn)配備的，在花器官剝離與觀察實(shí)驗(yàn)中要用到解剖鏡，而花粉發(fā)育時(shí)期鑒定用到光學(xué)顯微鏡，因此我們將這兩個(gè)實(shí)驗(yàn)整合在一起，既有效利用了實(shí)驗(yàn)室資源，又節(jié)約了時(shí)間。人工種子的制備和繼代培養(yǎng)基的配制合在一起，在培養(yǎng)基滅菌的過(guò)程中，制備人工種子，避免了學(xué)生等待滅菌的過(guò)程。

在傳統(tǒng)的細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)教學(xué)中，如母液配制、材料選擇等一般由實(shí)驗(yàn)人員或教師提前準(zhǔn)備，學(xué)生只是按照實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)完成實(shí)驗(yàn)的部分步驟。如原生質(zhì)體的分離、純化和融合實(shí)驗(yàn)，改變了原來(lái)實(shí)驗(yàn)室老師準(zhǔn)備好所有需要用的試劑，而讓學(xué)生全程參分離酶液、洗滌液、電融合液、化學(xué)融合劑的配制，將現(xiàn)有的部分過(guò)程性實(shí)驗(yàn)變?yōu)槿窟^(guò)程性實(shí)驗(yàn)。通過(guò)全程參與實(shí)驗(yàn)的整個(gè)過(guò)程，學(xué)生的實(shí)驗(yàn)技能得到較全面的綜合性訓(xùn)練。

為培養(yǎng)學(xué)生的綜合能力和探究精神，結(jié)合不同專(zhuān)業(yè)的學(xué)科方向，自選一些實(shí)驗(yàn)材料，獨(dú)立完成，也可以結(jié)合教師科研和大學(xué)生科創(chuàng)項(xiàng)目進(jìn)行，提高學(xué)生的綜合實(shí)驗(yàn)?zāi)芰突镜目蒲兴刭|(zhì)。

4 完善考核方式、注重學(xué)習(xí)效果

考核是教學(xué)中不可缺少的環(huán)節(jié)，通過(guò)考核對(duì)教學(xué)質(zhì)量及教學(xué)效果的反饋和檢查，一方面，檢查學(xué)生對(duì)知識(shí)的掌握程度;另一方面，教師可以發(fā)現(xiàn)教學(xué)中存在的問(wèn)題，及時(shí)改進(jìn)教學(xué)效果。細(xì)胞工程課程考核分為兩大部分，平時(shí)考核占30%，課程考試占70%。平時(shí)考核主要包括課堂表現(xiàn)（考勤，課堂討論，課堂提問(wèn)）和課后作業(yè)等方式對(duì)學(xué)生平時(shí)的表現(xiàn)進(jìn)行綜合考核。引導(dǎo)學(xué)生重視平時(shí)學(xué)習(xí)，防止期末突擊應(yīng)付考試。

實(shí)驗(yàn)課按照實(shí)驗(yàn)的性質(zhì)，分別考核，首先基礎(chǔ)性的實(shí)驗(yàn)中逐步降低實(shí)驗(yàn)報(bào)告的成績(jī)比例，將學(xué)生在實(shí)驗(yàn)課上的綜合表現(xiàn)，包括操作的規(guī)范程度、培養(yǎng)結(jié)果的好壞及衛(wèi)生情況等納入到考核的內(nèi)容，使學(xué)生養(yǎng)成良好的實(shí)驗(yàn)習(xí)慣。基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)的評(píng)定具體包括實(shí)驗(yàn)報(bào)告50%、課堂紀(jì)律10%、實(shí)驗(yàn)技能20%、實(shí)驗(yàn)結(jié)果10%和實(shí)驗(yàn)習(xí)慣（衛(wèi)生、實(shí)驗(yàn)用品使用等）10%。

其次，對(duì)于綜合性設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)的考核，主要從材料的選擇，方案的設(shè)計(jì)，團(tuán)隊(duì)協(xié)作，實(shí)驗(yàn)操作，報(bào)告書(shū)寫(xiě)的規(guī)范程度等方面來(lái)評(píng)價(jià)，因?yàn)閷?shí)驗(yàn)材料的選擇根據(jù)學(xué)生興趣，因此難易程度不同，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果僅作為參考基礎(chǔ)。這部分的成績(jī)?cè)u(píng)定具體包括材料的選擇10%，方案的設(shè)計(jì)30%，團(tuán)隊(duì)協(xié)作20%，實(shí)驗(yàn)操作及材料的生長(zhǎng)狀況20%，報(bào)告書(shū)寫(xiě)的規(guī)范程度20%。計(jì)算各部分的成績(jī)的平均成績(jī)，作為實(shí)驗(yàn)的最終成績(jī)。

對(duì)實(shí)習(xí)的考核，實(shí)行帶隊(duì)教師與實(shí)習(xí)基地指導(dǎo)教師的雙向考核。主要包括實(shí)習(xí)考勤（10%）、實(shí)習(xí)報(bào)告（30%）、實(shí)習(xí)帶隊(duì)老師（30%）和實(shí)習(xí)基地老師成績(jī)（30%）的雙向考核。

隨著細(xì)胞工程發(fā)展，在教學(xué)過(guò)程中授課教師不僅要不斷豐富學(xué)科發(fā)展的前沿和發(fā)展動(dòng)態(tài)，更新自身的知識(shí)理論框架，而且在教學(xué)過(guò)程中要不斷思考探索和總結(jié)，提高教學(xué)質(zhì)量，使學(xué)生在學(xué)習(xí)過(guò)程中真正有所收獲，為國(guó)家培養(yǎng)出綜合素質(zhì)較高具有創(chuàng)新能力的優(yōu)秀人才。

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第9篇：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)范文

關(guān)鍵詞：細(xì)胞培養(yǎng)室；建設(shè)與管理；配套設(shè)備；管理制度

Construction and administration of national engineering laboratory for cell culture

Meng Xiangyu， Gu Tiejun， Zhao Xinghong， Sun Bo， Shi Yuhua， Zhang Xizhen

Jilin University， Changchun， 130012， China

Abstract： Explored the construction， corollary equipment， function， common management， administration system of national engineering laboratory for cell culture， and the establishment of cell bank. We are making effect to develop the function of cell-cultrue laboratory， and improve the management of lab， which leading to higher study requirement and full necessary assurances for national engineering laboratory.

Key words： cell-culture laboratory； construction and administration； corollary equipment； administration system

細(xì)胞培養(yǎng)室是吉林大學(xué)艾滋病疫苗國(guó)家工程實(shí)驗(yàn)室的重要組成部分，細(xì)胞培養(yǎng)是生命科學(xué)研究領(lǐng)域的一種最基本、最重要、應(yīng)用最廣泛的研究技術(shù)之一[1，2]。對(duì)于疫苗國(guó)家工程實(shí)驗(yàn)室而言，建立一個(gè)設(shè)施完善、配套齊全的綜合性的細(xì)胞培養(yǎng)室至關(guān)重要，加強(qiáng)細(xì)胞培養(yǎng)室的日常管理，建立健全細(xì)胞培養(yǎng)室的管理制度，建立完備的細(xì)胞種子庫(kù)，是保證工程實(shí)驗(yàn)室其他各項(xiàng)科研工作順利開(kāi)展的不可或缺的重要一環(huán)[3-5]。筆者綜合在國(guó)家工程實(shí)驗(yàn)室中細(xì)胞培養(yǎng)室的建設(shè)與管理過(guò)程中積累的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，介紹細(xì)胞培養(yǎng)室的設(shè)計(jì)、籌建及其服務(wù)職能與管理等方面的工作。

1 細(xì)胞培養(yǎng)室的設(shè)計(jì)與建設(shè)

1.1 細(xì)胞培養(yǎng)室的面積要求及位置選擇

由于艾滋病疫苗國(guó)家工程實(shí)驗(yàn)室多數(shù)科研課題涉及細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行細(xì)胞實(shí)驗(yàn)操作的人員眾多；產(chǎn)學(xué)研相結(jié)合的工程實(shí)驗(yàn)室特色也要求細(xì)胞培養(yǎng)室不論從規(guī)模上還是從功能上都要滿足從科研到產(chǎn)業(yè)化的過(guò)度[6，7]，在設(shè)計(jì)過(guò)程中還要充分考慮細(xì)胞實(shí)驗(yàn)所需的配套設(shè)備的安裝和使用，滿足細(xì)胞培養(yǎng)室的環(huán)境設(shè)計(jì)要求和方便管理。因而，需要在工程實(shí)驗(yàn)室內(nèi)選擇一個(gè)相對(duì)獨(dú)立并有足夠面積的空間，來(lái)建設(shè)細(xì)胞培養(yǎng)室。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng)室環(huán)境要求及潔凈級(jí)別

由于細(xì)胞操作的潔凈度要求高，細(xì)胞培養(yǎng)室整個(gè)框架為潔凈級(jí)彩鋼板結(jié)構(gòu)，環(huán)氧自流平地面，無(wú)衛(wèi)生死角。細(xì)胞培養(yǎng)室設(shè)有內(nèi)走廊，封裝走廊與外相通的門(mén)窗，將細(xì)胞室與外面的實(shí)驗(yàn)室隔離開(kāi)來(lái)，成為一個(gè)相對(duì)獨(dú)立的區(qū)域，并配有高效過(guò)濾系統(tǒng)及臭氧發(fā)生器，使細(xì)胞室整個(gè)環(huán)境空間保持萬(wàn)級(jí)潔凈要求；內(nèi)頂棚安裝紫外燈，定期照射，為內(nèi)環(huán)境消毒；為滿足細(xì)胞培養(yǎng)室的溫、濕度要求，配備了專(zhuān)業(yè)凈化級(jí)別的通風(fēng)與空調(diào)系統(tǒng)；培養(yǎng)室入口處為三重緩沖設(shè)計(jì)，第一道入口處放置專(zhuān)用鞋柜，進(jìn)入細(xì)胞室的操作人員需統(tǒng)一換上細(xì)胞室專(zhuān)用的拖鞋，進(jìn)入第二道門(mén)需更換專(zhuān)用的白大衣，通過(guò)風(fēng)淋室進(jìn)入緩沖走廊去往不同的細(xì)胞操作間。

1.3 獨(dú)立細(xì)胞操作間的設(shè)計(jì)

為滿足不同課題、不同細(xì)胞株的培養(yǎng)要求，在細(xì)胞培養(yǎng)室的內(nèi)走廊設(shè)有8個(gè)獨(dú)立的細(xì)胞操作間，每個(gè)操作間內(nèi)配備最基本的細(xì)胞培養(yǎng)與操作的儀器設(shè)施，如全鋼實(shí)驗(yàn)臺(tái)、潔凈工作臺(tái)、CO2孵箱、電動(dòng)移液器及微量移液器等，房間內(nèi)也安裝高效過(guò)濾器與紫外線燈，滿足房間的無(wú)菌要求，并可定期對(duì)操作間進(jìn)行單獨(dú)的消毒處理。

1.4 細(xì)胞培養(yǎng)室專(zhuān)用儀器間的設(shè)計(jì)

由于進(jìn)入細(xì)胞培養(yǎng)室做實(shí)驗(yàn)的人員眾多，空間有限，一些公用的設(shè)備無(wú)法達(dá)到每個(gè)細(xì)胞操作間獨(dú)立配置一套的要求，因此為滿足整個(gè)細(xì)胞室的需求并方便所有細(xì)胞室人員的使用，在8個(gè)操作間相對(duì)中間的位置，建造了一個(gè)獨(dú)立的公共儀器間，配有專(zhuān)用的臺(tái)式離心機(jī)、倒置顯微鏡、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀、水浴鍋等常規(guī)儀器，并配置了數(shù)臺(tái)4 ℃冰箱及-20 ℃冰柜，滿足細(xì)胞操作者儲(chǔ)存細(xì)胞培養(yǎng)液和其他試劑之需。

1.5 洗刷間與高壓間的設(shè)計(jì)

相比于同類(lèi)實(shí)驗(yàn)室，國(guó)家工程實(shí)驗(yàn)室存在規(guī)模大、人員多、細(xì)胞培養(yǎng)量大的特點(diǎn)，完全使用一次性細(xì)胞培養(yǎng)耗材會(huì)大大提高科研成本，造成一定程度的浪費(fèi)，給國(guó)家工程實(shí)驗(yàn)室的可持續(xù)發(fā)展帶來(lái)一定的困難。因此，大量細(xì)胞培養(yǎng)最好使用可洗刷滅菌的玻璃培養(yǎng)瓶等可重復(fù)使用的耗材，為此，我們?cè)谂c入口相對(duì)應(yīng)的另一端設(shè)計(jì)了專(zhuān)門(mén)的洗刷間和高壓間，配備了專(zhuān)門(mén)的洗刷設(shè)備，濕熱、干熱等滅菌設(shè)備和專(zhuān)門(mén)的制水設(shè)備。這種設(shè)計(jì)是基于細(xì)胞室環(huán)境要求的凈污分流的原則[8]，由雙扉高壓滅菌柜和干熱滅菌柜將細(xì)胞培養(yǎng)區(qū)與洗刷準(zhǔn)備區(qū)隔離開(kāi)來(lái)，并配有傳遞窗來(lái)實(shí)現(xiàn)人流與物流的分離[9]。我們還配備了專(zhuān)門(mén)的工作人員負(fù)責(zé)非一次性細(xì)胞培養(yǎng)瓶及移液管等物品的清洗及高壓滅菌工作，滿足細(xì)胞室洗刷、高壓及配液等要求，既避免了一次性耗材使用的浪費(fèi)，又減輕了科研人員的負(fù)擔(dān)。

2 細(xì)胞培養(yǎng)室的服務(wù)理念

細(xì)胞培養(yǎng)室建設(shè)的宗旨是服務(wù)工程實(shí)驗(yàn)。為細(xì)胞培養(yǎng)室配備專(zhuān)門(mén)的工作人員和管理人員負(fù)責(zé)日常管理和服務(wù)，可以大大減輕科研人員的負(fù)擔(dān)。細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)對(duì)操作人員的要求，除要掌握熟練的操作技術(shù)外，更要掌握復(fù)雜的培養(yǎng)技術(shù)及嚴(yán)格的無(wú)菌要求。研究人員需要較長(zhǎng)時(shí)間才能熟練掌握操作技術(shù)，如果每天都被清洗、包裝和消毒等簡(jiǎn)單卻煩瑣的工作困擾，將會(huì)影響科研人員的效率，也使其不能專(zhuān)心致志地從事研究活動(dòng)[2]。因此，建立大型的綜合細(xì)胞培養(yǎng)室，并配備專(zhuān)門(mén)的管理人員，可以提高細(xì)胞培養(yǎng)的效率，加快科研進(jìn)程。由于人員眾多，技術(shù)熟練程度參差不齊，需要對(duì)進(jìn)入細(xì)胞室的人員進(jìn)行規(guī)范化管理，定期舉行技術(shù)培訓(xùn)。這樣，會(huì)對(duì)提高細(xì)胞操作人員的基本實(shí)驗(yàn)技能，幫助他們養(yǎng)成良好的實(shí)驗(yàn)習(xí)慣，減少事故的發(fā)生，杜絕浪費(fèi)，提高細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的效率起到不可估量的作用。

3 細(xì)胞培養(yǎng)室的管理

3.1 人員的管理

進(jìn)入細(xì)胞培養(yǎng)室做實(shí)驗(yàn)的人員，都須經(jīng)過(guò)管理人員的批準(zhǔn)，并進(jìn)行相應(yīng)的技術(shù)與安全培訓(xùn)，包括細(xì)胞室設(shè)備的使用、細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)服務(wù)和安全管理制度等，經(jīng)考核合格后，到管理人員處領(lǐng)取專(zhuān)門(mén)的拖鞋及工作服，到指定的細(xì)胞操作間進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。實(shí)驗(yàn)人員在細(xì)胞培養(yǎng)室工作期間，需聽(tīng)從管理人員的安排，承擔(dān)本操作間及相應(yīng)的細(xì)胞培養(yǎng)室公共區(qū)域的值日。為加強(qiáng)對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)室人員的管理，逐漸實(shí)行管理網(wǎng)絡(luò)化[10]，建立QQ群或微信群，在網(wǎng)絡(luò)上進(jìn)行入室申請(qǐng)、入室登記等管理，相互提醒細(xì)胞培養(yǎng)室使用注意事項(xiàng)，相互交流細(xì)胞培養(yǎng)及細(xì)胞培養(yǎng)室使用過(guò)程中經(jīng)常出現(xiàn)的問(wèn)題以及解決辦法等。

3.2 細(xì)胞培養(yǎng)室管理制度的建立

3.2.1 衛(wèi)生清潔制度

（1）每個(gè)進(jìn)入細(xì)胞室的工作人員應(yīng)保證個(gè)人衛(wèi)生[11]，必須洗手并用酒精消毒。（2）進(jìn)入緩沖間時(shí)，應(yīng)按照分配的編號(hào)更換潔凈的工作服和拖鞋，并將自己換下來(lái)的鞋放入指定的鞋架上。進(jìn)入細(xì)胞操作間時(shí)須戴帽子和口罩，進(jìn)出細(xì)胞培養(yǎng)室要隨手關(guān)門(mén)。（3）第一個(gè)進(jìn)入細(xì)胞培養(yǎng)室的人員應(yīng)及時(shí)打開(kāi)空調(diào)及空氣凈化裝置，最后離開(kāi)的人員負(fù)責(zé)關(guān)閉空調(diào)及空氣凈化裝置。（4）整個(gè)細(xì)胞室每周進(jìn)行一次衛(wèi)生消毒工作，每月進(jìn)行一次全面的清潔工作。

3.2.2 CO2培養(yǎng)箱的使用

（1）每天觀察CO2壓力表，如發(fā)現(xiàn)CO2氣體量不足，及時(shí)更換鋼瓶，同時(shí)觀察CO2鋼瓶上的流量指示表，空瓶上應(yīng)貼標(biāo)簽以示區(qū)別。培養(yǎng)箱內(nèi)應(yīng)放置溫度計(jì)，觀察并記錄其溫度與指示表溫度是否一致。（2）培養(yǎng)箱內(nèi)應(yīng)劃分不同使用區(qū)域，不同細(xì)胞應(yīng)放在不同的隔板層，每天觀察底部水盤(pán)，及時(shí)更換或添加，保持適當(dāng)?shù)臐穸取＃?）細(xì)胞室內(nèi)所有CO2培養(yǎng)箱均具有高溫消毒功能，非管理人員未經(jīng)允許不能動(dòng)此功能鍵，以免造成某些元件損壞[8]。

3.2.3 超凈工作臺(tái)的使用

（1）使用超凈臺(tái)前應(yīng)提前30分鐘用紫外線照射滅菌。（2）超凈臺(tái)內(nèi)的物品擺放整齊，便于操作。（3）注意安全，特別是酒精燈，如有酒精漏出應(yīng)立即吸干擦凈，如發(fā)生意外可用濕紗布、棉布類(lèi)蓋滅酒精燈。（4）實(shí)驗(yàn)結(jié)束后及時(shí)倒掉廢液缸內(nèi)的液體，需洗刷的物品應(yīng)沖洗后交給洗刷人員，暫時(shí)不用的液體封好瓶口后及時(shí)放回相應(yīng)的冰箱層，同時(shí)進(jìn)行臺(tái)面清潔。

3.2.4 液氮罐和低溫冰箱的管理

（1）管理人員需定期檢查液氮罐內(nèi)的液氮情況，并做好記錄，發(fā)現(xiàn)液氮不足及時(shí)訂購(gòu)補(bǔ)充。（2）往液氮罐內(nèi)轉(zhuǎn)移凍存細(xì)胞及取用細(xì)胞時(shí)，應(yīng)注意防凍安全。（3）存放細(xì)胞株時(shí)，根據(jù)細(xì)胞種類(lèi)的不同，放置在不同的分隔盒內(nèi)，同時(shí)標(biāo)記好細(xì)胞株的名稱(chēng)、凍存人員姓名與凍存時(shí)間。（4）低溫冰箱使用時(shí)應(yīng)按其種類(lèi)劃分不同區(qū)域，做好標(biāo)記并記錄。

3.2.5 儀器間的管理

儀器間內(nèi)所有儀器由管理人員統(tǒng)一安排定期清潔與保養(yǎng)，使用完畢應(yīng)及時(shí)關(guān)閉電源，并嚴(yán)格按照儀器標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程使用，由于操作不當(dāng)造成的儀器損壞按照損壞程度與金額給予責(zé)任人一定程度的經(jīng)濟(jì)處罰。

4 細(xì)胞種子庫(kù)的建立

工程實(shí)驗(yàn)室由于科研項(xiàng)目眾多，涉及課題內(nèi)容廣泛，因而細(xì)胞實(shí)驗(yàn)所涉及的細(xì)胞種類(lèi)繁多，需要相應(yīng)的足夠數(shù)量的細(xì)胞儲(chǔ)備才能滿足科研課題對(duì)各類(lèi)細(xì)胞的需求。利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196 ℃液氮中低溫保存，可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長(zhǎng)狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來(lái)，在需要的時(shí)候再?gòu)?fù)蘇細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。適度地保存一定量的細(xì)胞，可以防止因正在培養(yǎng)的細(xì)胞被污染或其他意外事件而使細(xì)胞種子丟失，起到細(xì)胞保種的作用[12]。除此之外，還可以利用細(xì)胞凍存的形式來(lái)購(gòu)買(mǎi)、寄贈(zèng)、交換和運(yùn)送某些細(xì)胞株[12]。經(jīng)過(guò)幾年的積累，細(xì)胞培養(yǎng)室技術(shù)人員已經(jīng)建立起了完備的細(xì)胞種子庫(kù)，凍存細(xì)胞株百余種，并建立了完備的細(xì)胞電子檔案，對(duì)細(xì)胞名稱(chēng)、種屬、來(lái)源、庫(kù)存數(shù)量、凍存時(shí)間、存放位置及其適宜的培養(yǎng)條件等進(jìn)行了詳盡的記錄，對(duì)實(shí)驗(yàn)室自建的細(xì)胞株與從外面采購(gòu)來(lái)的細(xì)胞株做明確的區(qū)分和標(biāo)記；科研人員與學(xué)生復(fù)蘇細(xì)胞要有嚴(yán)格的計(jì)劃，提出申請(qǐng)，做好復(fù)蘇記錄，并定期跟蹤細(xì)胞種子庫(kù)存情況，及時(shí)對(duì)庫(kù)存不足的細(xì)胞給予必要的補(bǔ)充。

5 結(jié)束語(yǔ)

隨著生命科學(xué)的飛速發(fā)展，建設(shè)一個(gè)大型綜合性的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室，適應(yīng)疫苗國(guó)家工程實(shí)驗(yàn)室的科研需求，建立健全完善的細(xì)胞室管理制度，建立完備的細(xì)胞種子庫(kù)，可以促進(jìn)工程實(shí)驗(yàn)室科研水平的提升，為加快科研進(jìn)程提供必要的保證，對(duì)工程實(shí)驗(yàn)室的可持續(xù)發(fā)展有著重要的現(xiàn)實(shí)意義。

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